Исследование свойств кофеина и его содержания в продуктах
СОДЕРЖАНИЕ
Введение
. Теоретическая часть
.1. История открытия кофеина,
описание, свойства, получение, хранение и применение
.2. Токсикологическое значение
кофеина
.3 Метаболизм и изолирование
кофеина
.4 Анализ кофеина
.4.1 Качественный
.4.2 Количественный
. Практическая часть
.1 Анкета опроса потребления
продуктов с кофеином
.2 Подготовка продуктов для
анализа на кофеин
.3 Методика количественного
определения кофеина методом йодометрического титрования
. Результаты и их обсуждение
.1 Анкетирование потребления
продуктов с кофеином
.2 Количественное определение
кофеина методом йодометрического титрования
Заключение
Список литературы
Введение
Алкалоид кофеин (1,3,7-триметилксантин)
содержится в листьях чая, зернах кофе, орехах кола, гуаране, широко используется
в качестве пищевых добавок, входит в состав многих энергетических напитков. Он
применяется при заболеваниях, сопровождающихся угнетением центральной нервной и
сердечно-сосудистой системы, для повышения психической и физической
работоспособности, уменьшения усталости и сонливости, понижает агрегацию
тромбоцитов.
Кофеинсодержащие напитки находят широкое
применение, в то же время границы диапазонов лечебной и токсической
концентрации этого препарата близки, в связи с чем возникает актуальность
необходимости контроля за содержанием кофеина в растительном сырье и пищевых
продуктах.
Целью данной работы является: исследование
свойств кофеина и его содержания в продуктах, наиболее часто употребляемых
жителями Нижнего Новгорода.
Для осуществления цели данной работы были
поставлены следующие задачи:
) Провести анализ литературы по данной теме,
рассмотреть свойства, строение, получение, токсикологическое значение,
качественный и количественный анализ, хранение и применение кофеина;
) Осуществить опрос, применяя метод
анкетирования, жителей Нижнего Новгорода, для определения наиболее
употребляемых продуктов содержащих кофеин;
) Провести количественное определение кофеина в
продуктах наиболее употребляемыми жителями Нижнего Новгорода.
.
Теоретическая часть
1.1 История открытия
кофеина, описание, свойства, получение, хранение и применение
Кофеин
Coffeinum
,3,7-Триметилксантин
C8H10N4O2·H2O
М.м. 212.21
Кофеин открыт впервые Рунге в 1819 г. Он
содержится (до 2%) в зернах кофе (Cojfea
arabica L.)
семейство мареновых - Rubiaceae,
листьях чая (Thea
sinensis
L.), семейство
чайных - Theaceae
и в других растениях. В небольших количествах в чае содержится теофиллин,
который был открыт Косселем в 1889 г. Теобромин впервые изучен русским ученым
А.А.Воскресенским в 1842 г, а в 1889 г был выделен из зерен кофе и чайных
листьев [1].
Представляет собой белые, шелковистые игольчатые
кристаллы или белый кристаллический порошок горьковатого вкуса, без запаха,
выветривающийся на воздухе, медленно растворим в 60 частях холодной воды, легко
растворим в горячей воде и хлороформе, трудно растворим в спирте, очень мало
растворим в эфире. Температура плавления 234-237º.
Природным источником получения пуриновых
алкалоидов служат отходы чайной промышленности (чайная пыль, обрезки листьев и
т.д.), содержащие 1-3% кофеина; бобы какао, в которых находится 1,5-2%
теобромина [2].
Известно несколько способов получения кофеина.
Один из них основан на противоточной экстракции. Водный экстракт очищают от
примесей, осаждают балластные вещества с помощью солей свинца, кальция, магния.
Фильтрат затем выпаривают. Перекристаллизацию кофеина производят из охлажденных
водных растворов. Аналогичным способом выделяют из бобов какао теобромин либо в
виде основания, либо в виде кальциевой соли (растворимой в воде).
Значительно больший выход дает способ получения
кофеина, разработанный в 1952 г. Н.А.Измайловым, Ю.В.Шостенко, В.Д.Безуглым. Он
основан на адсорбции кофеина из водных растворов с последующей десорбцией
хлороформом или дихлорэтаном.
Синтетические способы получения пуриновых
алкалоидов отличаются более высокой экономичностью и доступностью исходного
сырья. Таким сырьем является мочевая кислота, которую предварительно
синтезируют термической конденсацией двух молекул мочевины с ацеталем (110°С)
или извлекают водой из экскрементов птиц (гуано), где ее количество достигает
25%. Кофеин и теобромин синтезируют после предварительного получения ксантина
из мочевой кислоты действием формамида:
Ксантин затем метилируют диметилсульфатом. В
зависимости от условий метилирования получают кофеин или теобромин:
Кофеин получается, если метилирование выполняют
при рН 8,0-9,0, а теобромин - в присутствии гидроксида калия и метанола при
60-70° С.
Хранение.
Список Б. В хорошо укупоренной таре.
Применение.
Стимулятор центральной нервной
системы и кардиотоническое средство. Кофеин производит непосредственное и
прямое возбуждение различных отделов центральной нервной системы, увеличивает
работоспособность поперечнополосатых мышц, является сильным мочегонным
средством, повышает возбудимость и силу сердечной мышцы. Назначается внутрь в
порошках, пилюлях и таблетках. Препараты: «Кофетамин», «Кофицил», «Цитрамон» и
др [3-4].
Высшая разовая доза внутрь -
0,3 г.
Высшая суточная доза внутрь-1,0 г.
1.2 Токсикологическое значение кофеина
Главной особенностью кофеина как лекарственного
препарата является его возбуждающее влияние на ЦНС. Кофеин содержится в листьях
чая (Thea
sinensis, Camellia
sinensis, семейство Theaceae),
орехах кола (Cola
nitida, Cola
acuminata, семейство Sterculiaceae),
в зернах кофейного дерева (Cojfea
arabica, семейство Rubiaceae).
В медицинской практике используют кофеин и
кофеин-бензоат натрия. Применяют препараты внутрь 2-3 раза в день по 0,05-0,1 г
в качестве стимулятора ЦНС, кардио- тонического средства, при спазмах сосудов.
Для инъекций кофеин используют в виде кофеин-бензоата натрия.
Токсикомании, связанные со злоупотреблением
стимуляторов ЦНС, имеют общие черты с наркоманиями амфетаминовош ряда и
эфедроновой наркоманией, но протекают мягче и без тяжелых последствий. Острая
интоксикация вызывает эйфорию, ощущение бодрости, прилива сил, ясности
мышления, стремление к активной деятельности. Для достижения желаемого эффекта
требуется постоянно увеличивать дозу. Это приводит к резкому возрастанию
толерантности. В результате прием кофеина может достигать 100-200 таблеток в
сутки. Длительный прием истощает организм, ощущается разбитость, усталость,
повышенная сонливость, вялость, фон настроения снижен, возникают мысли
суицидального характера. Одновременно отмечается стойкая бессонница, что влечет
наркомана к приему снотворных.
Хроническая интоксикация крепко заваренным чаем
носит название «чифиризма». Чифирь - заварка чая, при которой 50 г чая
настаивают с 200-300 мл горячей воды.
Для острых отравлений кофеином (чаще всего
детей) характерно поражение желудочно-кишечного тракта, возбуждение ЦНС. За
счет сильной стимуляции желудочной секреции возникает боль в эпигастрии,
чувство жжения, иногда рвота. Артериальное давление падает, наблюдаются
эпилептоидные и клонико-тонические судороги. Смерть наступает в течение 1-2 ч
после отравления.
Патологоморфологическая картина при вскрытии
погибших неспецифична. Отмечают увеличение массы и объема органов за счет
сосудорасширяющего действия, резкий отек легких, головного мозга и его оболочек
[5].
1.3 Метаболизм и изолирование кофеина
Для кофеина характерна 1 фаза метаболизма,
включающая деметилирование и окисление.
Окислению подвергаются продукты деметилирования.
Кофеин обладает слабыми основными свойствами
(рКа=0,6). Устойчивых солей кофеин не образует.
При изолировании из биологических объектов общими
методами (Стаса-Отто, Васильевой) кофеин экстрагируется хлороформом из
растворов с рН=2 [6].
1.4 Анализ кофеина
1.4.1 Качественный
При осторожном прибавлении к
раствору кофеина (1:1000) раствора танина образуется обильный осадок,
растворимый в избытке реактива.
Водный раствор препарата не
должен давать осадка или помутнения от 0,1 н. раствора йода, а при добавлении
нескольких капель разведенной соляной кислоты образуется бурый осадок,
растворимый в избытке щелочи.
Мурексидная проба: к 0,01 г
кофеина прибавляют в фарфоровой чашке 10 капель пергидроля и10 капель
разведенной соляной кислоты. Смесь выпаривают на водяной бане досуха; остаток
желтого или красного цвета смачивают 1-2 каплями раствора аммиака - образуется
пурпурно-красное окрашивание.
Она основана на разрушении
молекулы пурина при нагревании с окислителем (пероксидом водорода, бромной
водой, азотной кислотой и т.д.) до образования смеси метилированных производных
аллоксана и диалуровой кислоты. Взаимодействуя между собой, они образуют
метилированные производные аллоксантина, которые под действием избытка раствора
аммиака приобретают пурпурно-красное окрашивание. Окраска обусловлена
появлением аммонийной соли тетраметилпурпуровой кислоты.
При проведении ТСХ-скрининга кофеин на
пластинках фиксируется реактивом Драгендорфа в виде оранжевого пятна.
При использовании в процессе аналитического
скрининга осадительных реактивов кофеин образует аморфные осадки с большинством
из них.
Для обнаружения кофеина используют цветные,
микрокристаллоскопические реакции, хроматографию в тонком слое сорбента,
УФ-спектрофотометрию, ИК-спектроскопию, ГЖХ и ВЭЖХ.
Обнаружение кофеина с помощью ТСХ проводят на пластинках
«Силуфол УФ-254» со слоем силикагеля. Хроматографируют в системе растворителей
хлороформ - ацетон (9:1) или толуол - ацетон - этанол - 25% раствор аммиака
(45:45:7,5:2,5).
Сухой остаток растворяют в 3-4 каплях
хлороформа, наносят на стартовую линию хроматографической пластинки. Рядом
наносят «стандарт» (8-10 мкг) - раствор кофеина. Пластинку после окончания
хроматографирования высушивают и обрабатывают реактивом Драгендорфа -
образующиеся оранжевые пятна по цвету и значению Rf
должны быть идентичны пятну «стандарта» (Rf
для кофеина в первой системе растворителей составляет 0,25±0,02, во второй -
0,65±0,02).
Реакция с хлоридом pmymu(II).
На сухой остаток на предметном стекле наносят каплю 5% раствора хлорида ртути(II).
Через 10-15 мин наблюдают образование крупных шелковистых бесцветных
иглообразных кристаллов. Осадок представляет собой комплексное соединение
состава C8Hl0N4O2∙HgCl2
(рис. 1).
Рис. 1. Кристаллы кофеина с хлоридом ртути(II)
Реакция с золотобромоводородной кислотой. На
сухой остаток на предметном стекле наносят каплю реактива, состоящего из 5%
раствора хлорида золота, концентрированной хлороводородной кислоты и ацетона
(1:1:1). К образовавшемуся осадку добавляют несколько кристаллов бромида калия
- осадок окрашивается в оранжево-красный цвет. При рассматривании осадка под
микроскопом наблюдают крупные желтовато-коричневые и бесцветные иглы (рис. 2).
Рис. 2. Кристаллы кофеина с
золотобромоводородной кислотой
Обнаружение кофеина по УФ- и ИК-спектрам. Часть
остатка растворяют в этиловом спирте или в 0,1 М растворе хлороводородной
кислоты и регистрируют спектр поглощения полученного раствора. Спектр кофеина
имеет полосу поглощения с максимумом при 272-273 нм.
Часть остатка растирают с бромидом калия,
прессуют, помещают полученный диск в прибор и регистрируют ИК-спектр. При
наличии в остатке кофеина обнаруживаются основные характеристические полосы при
1695, 1658 и 745 см-1.
Высокоэффективная жидкостная хроматография. Исследование
рекомендовано проводить на жидкостном хроматографе «Милихром А-02» производства
ЗАО «ЭкоНова». Методика основана на градиентном хроматографировании
анализируемого соединения в строго стандартных условиях с детектированием при
4-5 длинах волн. Для идентификации пиков на хроматограмме определяют время
удерживания вещества и спектральные отношения (табл. 1).
Таблица 1.
Хроматографические характеристики кофеина
Вещество
|
Время
удерживания, мин
|
Спектральные
отношения r=a1/a210
|
|
|
220
|
240
|
250
|
280
|
Кофеин
|
7,25
|
0,443
|
0,156
|
0,158
|
0,390
|
Газожидкостная хроматография. Для анализа
используют газожидкостный хроматограф «Кристалл-2000М» с кварцевой капиллярной
колонкой и неподвижной жидкой фазой НР-5. Детектор пламенно-ионизационный.
Газ-носитель - азот, давление - 110 кПа, деление потока - 1:15, расход водорода
- 20 мл/мин, воздуха - 200 мл/мин, температура детектора - 300°С, испарителя -
250°С, колонки - 220°С. Время анализа - 20 мин. Объем вводимой пробы - 0,5-1
мкл очищенных спиртовых растворов остатков, полученных при испарении
хлороформных экстрактов из биологических объектов. Одновременно в хроматограф
вводят спиртовые растворы в том же объеме веществ-«реперов», которые позволяют
идентифицировать исследуемые вещества без применения стандартов, используя справочные
данные. Для обнаружения ядовитого вещества в исследуемой пробе фиксируют время
удерживания определяемого соединения и логарифмический индекс удерживания (для
кофеина он равен 2232) [7].
1.4.2 Количественный
Кофеин в водных растворах
проявляет очень слабые основные свойства, практически его растворы имеют
нейтральную реакцию. С минеральными кислотами кофеин солей не образует (они
сразу же гидролизуются). Поэтому метод нейтрализации в водных растворах для
кофеина неприменим. В неводной среде (хлороформ, уксусный ангидрид, бензол)
кофеин проявляет выраженные основные свойства и его можно оттитровать хлорной
кислотой (индикатор кристаллический фиолетовый).
Метод неводного титрования.
Прямое титрование.
ВАК (внутриаптечный контроль): йодометрический
метод. Обратное титрование.
2
+ 2Na2S2O3 = 2NaI + Na2S4O6
Кофеин, теобромин и теофиллин можно
количественно определить цериметрическим методом. Избыток сульфата церия,
используемого в качестве титранта, при нагревании окисляет их в кислой среде до
образования аллоксанов (1,3-диметилаллоксан образуется при окислении кофеина,
3-метилаллоксан - при окислении теобромина). На примере кофеина процесс можно
представить следующим образом:
Избыток сульфата церия устанавливают
иодометрическим методом после добавления 10%-ного раствора иодида калия и
хлороформа. В качестве титранта используют тиосульфат натрия.
Так же количественное определение кофеина
проводится с помощью газожидкостной хроматографии и высокоэффективной
жидкостной хроматографии.
При определении с помощью ГЖХ используют
условия, описанные выше при качественном обнаружении кофеина. После хроматографирования
измеряют высоту (площадь) пика исследуемого вещества и высоту (площадь) пика
стандартного раствора кофеина. Расчет концентрации кофеина в исследуемом
объекте проводят по калибровочному графику.
При определении с помощью ВЭЖХ рекомендуется использовать
метод добавок, метод внутреннего стандарта и метод внешнего стандарта. Расчет
концентрации проводят по соответствующим формулам [8-11].
2. Практическая часть
.1
Анкета опроса потребления продуктов с кофеином
Образец анкеты опроса потребления продуктов с
кофеинов жителями Нижнего Новгорода представлен в таблице 2.
Таблица 2.
Анкета опроса потребления продуктов с кофеином
Укажите
ваш возраст
|
|
№
п/п
|
Наименование
продукта
|
Если
употребляете, то напротив продукта в клеточке необходимо поставить «+», если
нет, то пропускаете продукт
|
1.
|
Зеленый
чай «Greenfield»
|
|
2.
|
Зеленый
чай «Ява»
|
|
3.
|
Зеленый
чай «Принцесса Нури»
|
|
4.
|
Черный
чай «Greenfield»
|
|
5.
|
Черный
чай «Ява»
|
|
6.
|
Черный
чай «Принцесса Нури»
|
|
7.
|
Растворимый
кофе «Jacobs»
|
|
8.
|
Растворимый
кофе «Nescafe»
|
|
9.
|
|
10.
|
Заварной
(зерновой) кофе «Nescafe»
|
|
11.
|
Энергетический
напиток «Burn»
|
|
12.
|
Энергетический
напиток «Adrenalin Rush»
|
|
13.
|
Энергетический
напиток «Red Bull»
|
|
2.2 Подготовка продуктов для анализа на кофеин
Если продукт в жидкой форме, то отбирали 100 мл
продукта для анализа. Если продукт растворим в воде (растворимый кофе, чай), то
2,0 г (точная навеска, или один пакетик чая) его заваривали в 100 мл воды. Если
продукт нужно заваривать (заварной кофе), то 2,0 г (точная навеска) заваривали
в 102-105 мл воды, чтобы получить конечный объем 100 мл. Полученный раствор
является исследуемым раствором для количественного определения кофеина.
2.3 Методика
количественного определения кофеина методом йодометрического титрования
Согласно ГОСТ 29148-91 [12].
10 мл исследуемого раствора титруют из бюретки
0,05 моль/л раствором тиосульфата натрия до неполного обесцвечивания и
заканчивают титрование в колбе после прибавления 0,5 мл раствора крахмала.
Параллельно проводят
контрольное определение, взяв вместо исследуемого раствора 10 мл
дистиллированной воды.
3
3. Результаты и их обсуждение
3.1 Анкетирование
потребления продуктов с кофеином
Опрос проводили среди молодежи города Нижнего
Новорода в возрасте 16-28 лет. Были опрошены 36 человек, из них 20 женщин и 16
мужчин. Нужно учесть тот факт, что один человек может употреблять как кофе, так
и чай и энергетические напитки, при том разных фирм.
Результаты опроса представлены в таблице 3.
Таблица 3.
Результаты опроса потребления продуктов с
кофеином жителями Нижнего Новгорода
№
п/п
|
Наименование
продукта
|
Количество
человек потребляемых продукт
|
Процент
потребления от общего количества опрошенных человек
|
1.
|
Зеленый
чай «Greenfield»
|
15
|
41,7
%
|
2.
|
Зеленый
чай «Ява»
|
10
|
27,8
%
|
3.
|
Зеленый
чай «Принцесса Нури»
|
7
|
19,4
%
|
4.
|
Черный
чай «Greenfield»
|
12
|
33,3
%
|
5.
|
Черный
чай «Ява»
|
8
|
22,2
%
|
6.
|
Черный
чай «Принцесса Нури»
|
3
|
8,3
%
|
7.
|
Растворимый
кофе «Jacobs»
|
23
|
63,9
%
|
8.
|
Растворимый
кофе «Nescafe»
|
28
|
77,8
%
|
9.
|
Заварной
(зерновой) кофе «Jacobs»
|
26
|
72,2
%
|
10.
|
Заварной
(зерновой) кофе «Nescafe»
|
31
|
86,1
%
|
11.
|
Энергетический
напиток «Burn»
|
29
|
80,6
%
|
12.
|
21
|
58,3
%
|
13.
|
Энергетический
напиток «Red Bull»
|
18
|
50,0
%
|
Как видно из приведенной таблицы 3 наиболее
потребляемым зеленым чаем является зеленый чай «Greenfield»
(41,7 %), черным чаем - черный чай «Greenfield»
(33,3 %), растворимым кофе - растворимое кофе «Nescafe» (77,8 %), заварным
(зерновым) кофе - «Nescafe» (86,1 %) и энергетическим напитком - «Burn»
(80,6 %).
Следовательно, для количественного определения
кофеина будут взяты образцы зеленого и черного чая фирмы «Greenfield»,
растворимого и зерного кофе фирмы «Nescafe» и энергетического напитка фирмы «Burn».
3.2 Количественное
определение кофеина методом йодометрического титрования
Метод основан на полном осаждении кофеина в
форме его периодида раствором йода в йодистом калии с последующим разрушением
этого соединения спиртом и титрованием выделившегося йода раствором тиосульфата
натрия.
Уравнение реакции:
Массовую долю кофеина (X) в расчете на сухую
массу в процентах для вычисляли по формуле:
где V1
- объем раствора тиосульфата натрия, израсходованный на титрование исследуемого
раствора, мл;
V2
- объем раствора тиосульфата натрия, израсходованный на титрование контрольного
раствора, мл;
V3
- общий объем исследуемого раствора, 100 мл;
- объем исследуемого раствора, мл;
m - масса навески
кофе или чая, г (для энергетического напитка масса не указывается, то есть
равна 1);
К - коэффициент поправки к титру раствора
тиосульфата натрия (1,0000);
Т - коэффициент пересчета (1 мл раствора
тиосульфата натрия с концентрацией 0,05 моль/дм3 соответствует
0,002427 г безводного кофеина), г/мл.
Вычисления проводили до второго десятичного
знака.
Результаты количественного определения кофеина в
продуктах наиболее употребляемыми жителями Нижнего Новгорода представлены в
таблице 4.
Таблица 4.
Результаты количественного определения кофеина в
продуктах наиболее употребляемыми жителями Нижнего Новгорода
№
п/п
|
Наименование
|
Масса
продукта взятого на анализ, г
|
Объем
тиосульфата натрия, израсходованный на титрование исследуемого раствора, мл
|
Объем
раствора тиосульфата натрия, израсходованный на титрование контрольного
раствора, мл
|
Процентное
содержание кофеина в продукте, %
|
1.
|
Зеленый
чай «Greenfield»
|
2,0
|
2,27
|
0,2
|
2,51
|
2.
|
Черный
чай «Greenfield»
|
2,0
|
3,22
|
0,2
|
3,66
|
3.
|
Растворимый
кофе «Nescafe»
|
2,0
|
2,04
|
0,2
|
2,23
|
4.
|
Заварной
(зерновой) кофе «Nescafe»
|
2,0
|
3,50
|
0,2
|
4,01
|
5.
|
Энергетический
напиток «Burn»
|
10,0
|
0,81
|
0,2
|
1,48
|
Из полученных данных таблицы 4 видно, что
наиболее содержание кофеина имеет зерновое кофе «Nescafe», его потребляет
наибольшее количество жителей Нижнего Новгорода - 86,1 %. На втором месте стоит
черный чай «Greenfield».
А вот стоящий на третьем месте по потреблению растворимый кофе «Nescafe» по
содержанию занимает четвертое место.
Заключение
. Исследованы и описаны свойства,
строение, получение, токсикологическое значение, хранение и применение кофеина.
Так же дана характеристика качественным и количественным методам анализа
кофеина.
. По данным опроса наиболее потребляемым
зеленым чаем является зеленый чай «Greenfield»
(41,7 %), черным чаем - черный чай «Greenfield»
(33,3 %), растворимым кофе - растворимое кофе «Nescafe» (77,8 %), заварным
(зерновым) кофе - «Nescafe» (86,1 %) и энергетическим напитком - «Burn»
(80,6 %).
. Йодометрическим методом определено, что
наиболее содержание кофеина имеет зерновое кофе «Nescafe», его потребляет
наибольшее количество жителей Нижнего Новгорода - 86,1 %. На втором месте стоит
черный чай «Greenfield».
А вот стоящий на третьем месте по потреблению растворимый кофе «Nescafe» по
содержанию занимает четвертое место.
Полученный результат указывает на то, что
продукт с наибольшим содержанием кофеина так же наиболее употребляемый. Это
может указывать на то, что продукты содержащие кофеин вызывают незначительную
зависимость к употреблению.
Список литературы
1. Беликов
В.Г. «Фармацевтическая химия». В 2-х ч. Учебное пособие / В.Г. Беликов - 4-е
изд., перераб. и доп.- М: МЕДпресс-информ, 2007. - 624 с.
. Избранные
лекции по фармацевтической химии. Часть 1-я. Учеб. пособие / Под ред. проф.
Л.А. Чекрышкиной. Изд. 5-е испр. и доп. - Пермь: ПГФА, 2015. - 323 с.
. Глущенко
Н.Н., Плешненева Т.В., Попков В.А. Фармацевтическая химия. М.: Академия, 2004.
- 384с.
. Токсикологическая
химия: учебник для студентов фармацевтических вузов и факультетов / Т. Х.
Вергейчик ; под ред. проф. Е. Н. Вергейчика. - М. : МЕДпресс-информ, 2009. -
399 с.
. Токсикологическая
химия: метаболизм и анализ токсикантов : учеб. пособие для мед. и фармацевт.
вузов / Е. Ю. Афанасьева и др.; под ред. Н. И. Калетиной. - М. : ГЭОТАР-Медиа,
2008. - 1015 с.
. Токсикологическая
химия. Аналитическая токсикология: учебник/Под ред. Р.У. Хабриева, Н.И.
Калединой. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.- 752 с.
. Андреева
К.Ю., Дмитренко С.Г., Золотов Ю.А. Спектрофотометрическое определение кофеина и
теофиллина по реакции азосочетания с тетрафторборатом 4-нитрофенилдиазония //
Зав. лаб. Диагностика материалов. - 2010. - Т.76, №2. - С.21-24.
9. Piezko
G., Baranovska I., Flores A. Determination of energizers in energy drinks // Журн.
аналит.
хим.
- 2010. -Т.12, №65. - С.1257-1263.
10. Хасанов
В.В., Дычко К.А., Куряева Т.Т., Рыжова Т.Л., Мальцева Е.В. Новый способ
определения кофеина// Журн. прикладной химии. - 2005. -Т.78, №.9. -
С.1451-1454.
. Пилипенко
В.П., Бибик О.В., Прихода Н.Н. Сравнительная характеристика методов определения
кофеина // Вопросы химии и хим.технол. - 2009. - №2.-С.89-91.
. ГОСТ
29148-91. Кофе натуральный растворимый. Технические условия.