Основные гематологические, биохимические и иммунологические показатели крови собак, зараженных возбудителем Opisthorchis felineus

Основные гематологические, биохимические и иммунологические показатели крови собак, зараженных возбудителем Opisthorchis felineus

НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящей дипломной работе использованы ссылки на следующие нормативные документы:

ГОСТ12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия.

ГОСТ1770-74Е Посуда мерная лабораторная стеклянная.

ГОСТ 17227-71 рН-метры, таблетки для приготовления рабочих буферных растворов.

ГОСТ17299-78 Спирт этиловый технический. Технические условия.

ГОСТ 20292-74 Пипетки вместимостью до 10 см3 с ценой деления 0,01 и 0,1 см3

ГОСТ29230-91- (ИСО 835-4-81) Посуда лабораторная стеклянная

ГОСТ30204-95 Приборы холодильные бытовые. Эксплуатационные характеристики и методы испытаний

ГОСТ 4180-85 СПКП. Меры массы. Номенклатура показателей

ГОСТ 4233-77 Хлористый натрий.

ГОСТ4517-87 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе.

ГОСТ 919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов.

ГОСТ 555-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия.

ГОСТ 6709-72 - Вода дистиллированная. Технические условия.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

В настоящей дипломной работе применяются следующие термины с соответствующими определениями:

Амилаза - фермент, гликозил-гидролаза, расщепляющий крахмал до олигосахаридов, относится к ферментам пищеварения.

Антиген - любая молекула, которая специфично связывается с антителом.

Антитела - белки сыворотки и других биологических жидкостей, которые синтезируются в ответ на введение антигена и обладают способностью специфически взаимодействовать с антигеном, вызвавшим их образование.

Аланинаминотрансфераза (АЛТ) - это фермент, который принимает непосредственное участие в биохимических процессах, проходящих в организме человека. В частности, он участвует в образовании пировиноградных кислот и глутамата путем переноса аминокислоты из одной биологической молекулы в другую.

Аспартатаминотрансфераза (АСТ) - фермент белкового обмена в организме.

Базофилы - это крупные гранулярные лейкоциты <#"882337.files/image001.jpg">

Рисунок 1 - Счетная камера Горяева

Счетная камера Горяева (рисунок 1) состоит из 225 больших квадратов, 25 из которых поделено на 16 маленьких. Единицей отсчета является маленький квадрат. Его сторона равна 1/20 мм, а площадь - 1/20x1/20 = 1/400 мм2. Объем крови, помещающийся над маленьким квадратом, равен 1/400 мм2х1/10 мм = 1/4000 мм3 (1/10 мм - высота слоя крови).

Методика подсчета эритроцитов: в сухую пробирку точно отмеривают 4 мл 3%-го раствора NaCl. Кровь избирают пипеткой от гемометра Сали до метки «0,02 мл» и осторожно выдувают в раствор. Пипетку несколько раз промывают этим же раствором. Стеклянной палочкой кровь тщательно перемешивают в течение 40-60 секунд, после чего однородную каплю при помощи этой же палочки помещают на сетку камеры Горяева, к которой предварительно притерто покровное стекло до появления цветных - «ньютоновских колец». Заполнив камеру раствором крови, ставят ее под микроскопом и приступают к подсчету. Эритроциты считают при малом увеличении (окуляр х15) и 5 больших квадратах, имеющих дополнительно по 16 маленьких квадратиков. Чтобы избежать ошибки из-за возможного неравномерного распределения эритроцитов в камере, подсчет производится в квадратах, расположенных по диагонали, используя правило Егорова. Подсчитав количество эритроцитов в каждом очередном квадрате, записывают цифры в тетрадь, а затем суммируют все числа, найденные в 5 квадратах. Формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

Х=  (1);

где Х - искомое число эритроцитов в 1 мкл крови (или в мм3);

Э - сумма эритроцитов, подсчитанных в 5 больших квадратах;

- объем части камеры над одним маленьким квадратиком;

- разведение крови;

- количество маленьких квадратиков в 5 больших квадратах (5х16=80).

Эритроцит заполнен гемоглобином. В среднем, в одном эритроците находится примерно 280 млн. молекул гемоглобина. Гемоглобин представляет собой сложный глобулярный белок, полипептидные цепи которого свернуты в компактную глобулу. Состоит он из белковой части - глобина и небелковой пигментной группы - гема, соединенных между собой гистидиновым мостиком. В молекуле гемоглобина имеется 4 гема. Каждый гем построен из 4 пирроловых колец и содержит Fe2+. Гем является активной, или простетической, группой и обладает способностью присоединять или отдавать О2. Глобин представлен двумя α и β полипептидными цепями, образующими с СО2 карбаминовую связь.

Различают физиологические соединения гемоглобина (НвО2, НвСО2) и патологические (НвСО, метгемоглобин). Физиологические соединения способны обратимо присоединять О2 и СО2 и легко участвуют в газообмене. Патологические соединения препятствуют присоединению О2 (НвСО) или его отдаче (метгемоглобин, где железо переходит в трехвалентную форму).

В норме содержание гемоглобина в крови собак: 11-14% (110-140 г/л).

Относительное насыщение эритроцитов гемоглобином называется цветным показателем крови (ЦП). При подсчете за норму принимается количество эритроцитов, равное 5 млн. в 1 мкл крови, и гемоглобина - 166 г/л. Определяют среднее количество гемоглобина в 1 эритроците (166/5 млн. = 0,000033 мкг, или 33 пг-пикограмм).

Для определения количества гемоглобина применяют колориметрический метод Сали.

Гемометр Сали представляет собой штатив с тремя пробирками (рисунок 2). Боковые пробирки заполнены стандартным раствором солянокислого гематина и запаяны. Средняя пробирка градуирована и служит для исследования крови.

Рисунок 2 - Гемометр Сали: 1 - корпус, 2 - запаянные пробирки со стандартом, 3 - градуированная пробирка, 4 - капиллярная пипетка для взятия крови, 5 - глазная пипетка, 6 - стеклянная палочка

Кровь в количестве 0,02 мл насасывают в пипетку и выдувают в среднюю пробирку гемометра, где предварительно находится 0,2 мл 0,1N НСl. Пипетку несколько раз промывают, насасывая и выдувая раствор. Под воздействием НСl гемоглобин превращается в соляно- кислый гематин коричневого цвета. Затем в этот раствор постепенно добавляют дистиллированную воду, помешивая стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет раствора не совпадет с цветом стандартных растворов. Отмечают на шкале уровень жидкости в пробирке - это будет количество гемоглобина.

Вычисление производится по формуле:

ЦП= : (2);

Где,  - количество Нв и эритроцитов в анализируемой крови, а 166 и 5000000 - нормальное количество Нв в мкг/мкл и эритроцитов в 1 мкл.

Упрощенная формула для подсчета цветного показателя крови следующая:

ЦП =  (3);

В норме цветной показатель крови составляет 0,8-1. Эритроциты, имеющие такой показатель, называются нормохромными. Если ЦП>1, то эритроциты называют гиперхромными, а если <0,8 - гипохромными.

В крови, предохраненной от свертывания, эритроциты начинают оседать (СОЭ). Величина СОЭ зависит от числа эритроцитов, их размеров, формы и, особенно, от белкового состава плазмы, т.к. белки, адсорбируясь на эритроцитарной мембране, уменьшают её заряд. Тогда эритроциты образуют так называемые «монетные столбики» и скорость их оседания возрастает. При некоторых патологических состояниях СОЭ существенно повышается.

При определении скорости оседания эритроцитов пользуются прибором Панченкова (рисунок 3).

Прибор Панченкова состоит из штатива, в котором могут быть зафиксированы в вертикальном положении специальные капилляры (рисунок 3). Капилляры градуированы в миллиметрах. На капилляре есть метки: «0» (нанесена на расстоянии 100 мм от заостренного конца), «К» (кровь - на уровне нуля) и метка «Р» (реактив - на уровне 50 мм).

Рисунок 3 - Прибор Панченкова для определения СОЭ: А - общий вид; Б - капилляр; В - часовое стекло; 0 - верхняя метка, находится на расстоянии 100 мм от конца капилляра; 100 - нижняя метка, от которой отсчитывается 100 мм; К - уровень набора крови, совпадает с меткой «0»; Р - уровень набора реактива, расположен на расстоянии 50 мм от конца капилляра

Капилляр предварительно промывают 5%-ным раствором цитрата натрия, набирают его до метки «Р» и выдувают на часовое стекло. Затем дважды заполняют капилляр до метки «К» кровью, выдувают на часовое стекло, где находится цитрат натрия. Тщательно перемешивают с ним. После этого смесь насасывают до метки «К» и капилляр устанавливают в штатив на 1 час. СОЭ определяют по высоте образовавшегося верхнего столбика плазмы в капилляре.

В норме эритроциты собаки оседают со скоростью 4-10 мм/час.

Лейкоциты, или белые кровяные тельца в отличие от эритроцитов имеют ядра. Лейкоциты разнообразны по форме, происхождению, функциям и своему количественному представительству в крови. Процентное соотношение различных форм лейкоцитов называется лейкоцитарной формулой (таблица 1).

Таблица 1 - Лейкоцитарная формула крови собаки

Различают пять видов лейкоцитов: эозинофилы, базофилы, нейтрофилы, лимфоциты и моноциты. Лейкоциты неодинаковы по величине, форме ядер, свойствам цитоплазмы и функциям. Диаметр их колеблется от 6 до 25 мкм. По наличию в цитоплазме зернистости лейкоциты делят на зернистые - гранулоциты (нейтрофилы, базофилы и эозинофилы) и незернистые - агранулоциты (моноциты и лимфоциты) [27].

Продолжительность жизни лейкоцитов разная: от нескольких часов и дней до многих десятков лет.

Основная функция лейкоцитов - обеспечение организма специфической и неспецифической формами защиты от микробов, вирусов, патогенных простейших, чужеродных белков, клеток, тканей, измененных аутоантигенов. Иммунитет - способ защиты организма от живых тел и веществ, несущих на себе признаки генетической чужеродности. Одной из неспецифических форм защиты является фагоцитоз, осуществляемый в основном нейтрофилами и моноцитами.

Специфические формы защиты обеспечиваются лимфоцитами, которые создают специфический гуморальный (образование антител) и клеточный (образование иммунных лимфоцитов) иммунитет в ответ на действие антигенов. Клеточный иммунитет обращен в основном против клеточных антигенов - бактерий, патогенных грибов, чужеродных клеток и тканей (пересаженных или опухолевых).

Нейтрофилы первыми прибывают к месту повреждения тканей за счет своей способности к активному передвижению. Основная функция нейтрофилов - фагоцитарная (один нейтрофил способен фагоцитировать 20-30 бактерий). Они уничтожают микробы и их токсины, разрушающиеся клетки собственного организма или чужеродные частицы. Противомикробная функция нейтрофилов проявляется в секретировании ими в окружающую среду лизосомных катионных белков и гистонов, противовирусное действие - в продукции белка интерферона. Кроме того, они выделяют вещества, стимулирующие регенерацию тканей. Нейтрофилы делятся на сегментоядерные и палочковидные. У собак содержание сегментоядерных нейтрофилов в крови составляет 43-71%, а палочковидных - 2,0-5,5% от общего количества лейкоцитов.

Базофилы обладают слабовыраженной способностью к фагоцитозу, синтезируют противосвертывающее вещество гепарин, а также гистамин, расширяющий капилляры в очаге воспаления, что ускоряет процессы рассасывания и заживления. Чрезмерное освобождение гистамина из базофилов происходит при различных аллергических реакциях под воздействием комплекса антиген-антитело. В норме у собак в крови содержится 0-1% базофилов от общего содержания лейкоцитов.

Эозинофилы также способны к фагоцитозу, но их основная функция - участие в разрушении и обезвреживании чужеродных белков, токсинов белкового происхождения, комплексов антиген-антитело. Эозинофилы фагоцитируют гранулы базофилов, содержащих много гистамина, а также продуцируют фермент гистаминазу, разрушающую поглощенный гистамин. Нейтрализация последнего замедляет чрезвычайное проявление аллергических реакций, поэтому количество эозинофилов возрастает при аллергических состояниях, глистной инвазии, болезнях кожи, интоксикациях. Помимо этого, эозинофилы участвуют в фибринолизе, поскольку вырабатывают фермент плазминоген, который, переходя в плазмин, расщепляет нити фибрина в кровяном сгустке. У здоровой собаки в норме содержится от 0,5 до 6,0% эозинофилов.

Моноциты обладают выраженной фагоцитарной и бактерицидной активностью. Один моноцит способен фагоцитировать до ста микробов. Их влияние распространяется и на погибшие лейкоциты, поврежденные клетки воспаленной ткани, что в целом приводит к очищению очага воспаления и подготовке его для регенерации. В этом смысле моноциты являются «дворниками организма». Они из крови переходят в ткани, где дозревают, превращаясь в тканевые макрофаги, участвующие затем в формировании специфического иммунитета. Поглощая чужеродные вещества, макрофаги переводят их в особые соединения, которые вместе с лимфоцитами формируют специфический иммунный ответ - выработку антител. Содержание моноцитов в норме равно 2-12% от всех лейкоцитов.

Лимфоциты - центральное звено иммунной системы организма. Они осуществляют общий иммунный надзор. Различая «свое» и «чужое» с помощью своих рецепторов, лимфоциты обеспечивают защиту от всего чужеродного, способствуя сохранению генетического постоянства внутренней среды. Различают Т-лимфоциты (тимусзависимые) и В-лимфоциты (бурсозависимые). Т-лимфоциты возникают в костном мозге и проходят дифференцировку в вилочковой железе (Тhymus). В-лимфоциты также продуцируются костным мозгом, а дифференцировку проходят в лимфоидной ткани кишечника, червеобразного отростка, небных и глоточных миндалинах (у птиц - в фабрициевой сумке - Bursa Fabrisius). Основная функция Т-лимфоцитов - обеспечение клеточного иммунитета. Формы Т-лимфоцитов: Т-киллеры (убийцы) - обеспечивают реакцию клеточного иммунитета, отторжение трансплантанта, разрушение опухолевых клеток, клеток-мутантов и т.д. Т-хелперы (помощники) кооперируются с В-лимфоцитами при выработке антител или стимулируют Т- киллеры. Т-супрессоры (угнетатели) - блокируют чрезмерные реакции В-лимфоцитов и подавляют иммуный ответ. Основная функция В-лимфоцитов - обеспечение гуморального иммунитета путем выработки антител (иммунных гамма-глобулинов). В-лимфоциты очень специфичны: каждая их группа (клон) реагирует лишь с одним антигеном и отвечает за выработку антител только против этого антигена (специфический иммунитет). Различают несколько типов В-лимфоцитов (В1-клетки, В2-клетки и т.д.), которые выполняют разнообразные функции. В норме содержание лимфоцитов в крови у собак составляет 42-74% от общего числа белых клеток крови.

Принципы подсчета лейкоцитов и эритроцитов одинаковы. Различие заключается в том, что кровь для лейкоцитов разводится в 20 раз в 3%-ном растворе уксусной кислоты, подкрашенном метиленовой синькой, а сам подсчет ведется в 400 маленьких квадратиках (расположенных в 25 больших квадратах) камеры Горяева.

В сухую чистую пробирку отмеривают 0,4 мл 3%-ного упомянутого раствора. Кровь набирают пипеткой от гемометра Сали до метки 0,02 мл и осторожно выдувают в раствор. Затем перемешивают и однородную каплю с помощью стеклянной палочки помещают под покровное стекло на сетку камеры Горяева. Приступают к подсчету лейкоцитов и суммируют общее количество клеток в 25 больших квадратах.

Формула для вычисления количества лейкоцитов такова:

Х=  (4);

где Х - искомое число лейкоцитов;

Л - сумма лейкоцитов в 25 больших квадратах;

- объем части камеры над одним маленьким квадратиком;

- разведение крови;

- количество маленьких квадратиков в 25 больших квадратах [24].

В норме количество лейкоцитов составляет 5,5-12,5*109/л, или 5,5-12,5 тыс. в мм3 [24].

Тромбоциты, или кровяные пластинки, представляют собой бесцветные сферические, лишённые ядер тельца. Их диаметр 2-3 мкм, в 3 раза меньше диаметра эритроцитов. Тромбоциты образуются в красном костном мозге и селезёнке. Продолжительность жизни около 4 дней. Разрушение их происходит в селезёнке. Значительная часть их депонирована в селезёнке, печени, лёгких и в случае необходимости поступает в кровь.

Число тромбоцитов в крови около 180-400*109/л. Состояние, при котором количество красных кровяных пластинок снижается ниже 180 109/л, называется тромбоцитопенией, а при повышении их уровня более 400 109/л - тромбоцитозом.

Основная функция тромбоцитов связана с их участием в свёртывании крови. При ранении кровеносных сосудов тромбоциты разрушаются. При этом из них выходит в плазму ряд веществ, необходимых для формирования кровяного сгустка - тромба. Как правило, образование тромба сопровождается сужением кровеносных сосудов. Этому способствует выделяющееся при разрушении кровяных пластинок особое сосудосуживающее вещество [25].

Подсчет тромбоцитов также ведется с применением камеры Горяева.

Исследуемую кровь разводят в 200 раз для предотвращения свертывания и агглютинации тромбоцитов в консервирующей жидкости, например в 5-7% растворе трилона Б Для этого в сухую пробирку набирают 4 мл реактива и 0,02 мл крови. Перемешивают и оставляют на 25-30 мин для гемолиза эритроцитов. Помещают счетную камеру во влажную камеру на 5 мин для оседания тромбоцитов. Тромбоциты считают в 25 больших квадратах.

Расчет тромбоцитов проводят по формуле:

Х =  = а*2000 (5);

где Х - число тромбоцитов в 1 мкл крови;

а - число тромбоцитов, сосчитанных в 25 больших квадратах,

- разведение крови,

- число сосчитанных квадратов,

- объем одного большого квадрата 1/250 мкл.

Число подсчитанных тромбоцитов умножают на 2000.

Помимо камеры Горяева подсчет тромбоцитов проводят в мазках крови (по Фонио).

В качестве антикоагулянтов применяют 14% раствор сульфата магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА). Реактив набирают в капилляр Панченкова до метки «75» и вносят в пробирку, затем добавляют кровь, взятую тем же капилляром, до метки «0». Содержимое пробирки перемешивают и готовят тонкие мазки. Фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе в течение 2-3 ч (при использовании раствора сульфата магния) и в течение 30-45 мин (при приме нении ЭДТА). Высохшие мазки микроскопируют с иммерсионным объективом, подсчитывая количество тромбоцитов в тонких местах препарата.

Подсчет количества тромбоцитов <#"882337.files/image010.jpg">

Рисунок 4 - Экспериментальная группа собак

Обнаружение инвазированных особей среди рыб семейства карповых

Для проведения экспериментального заражения проводили поиск инвазированных особей среди рыб семейства карповых.

Отлов рыбы проводили в озерах Акмолинской области, многие из которых имели сообщение с рекой Нура, являющейся одним из очагов развития O. felineus. Рыба доставлялась с озер Коргалжынского (Шолак, Шалкар, Есей, Каражар, Биртабан, Садыбай, р. Нура), Астраханского (Камысты), Аршалынского (Байдал), Целиноградского (Майбалык) районов. Для исследования отбирались следующие виды рыб: карп, язь, плотва, лещ, окунь, карась, чебак (рисунок 5).

Рисунок 5 - Рыба, выловленная для выловленная для исследования на наличие заражения метацеркариями возбудителя O. felineus

Для обнаружения метацеркариев в тканях рыбы использовали компрессионный метод. Для этой цели исследовали по 5 проб мышц с подкожной клетчаткой с обеих сторон рыбы: по 3 пробы из спинной и 2 из брюшной части мышц с каждой стороны. Готовые компрессионные препараты просматривали под бинокуляром при увеличении в 16 раз (рисунок 6).

Рисунок 6 - Приготовление компрессориев для исследования мышечной ткани рыбы на наличие метацеркариев описторхоза

животное гельминтоз антиген казахстан

Всего было исследовано 1049 особей рыб различных видов из семейства карповые. Данные по исследованию рыбы на наличие метацеркариев возбудителя описторхоза, в зависимости от видового состава и места обитания, приведены в таблице 2.

Таблица 2 - Результаты исследования рыбы на наличие описторхоза

Исходя из данных таблицы 2, следует, что рыба из семейства карповые, выловленная в озерах четырех районов Акмолинской области, больше всего подвержена инвазии возбудителем описторхоза в Коргалжынском районе. При этом зараженность описторхозом рыбы в инвазированных водоемах колеблется в зависимости от вида и составляет: язь - 36%, лещ - 4,4%, плотва - 6%.

Заражение собак (антигельминтики, копрологию (перед и после), вакцинация, заражение)

Инвазированную описторхозом рыбу использовали для скармливания собакам на 12 день после последней вакцинации путем вольного скармливания в течение 4 дней.

Изучение гематологических показателей крови зараженных собак. Перед началом заражения у всех собак опытной группы были отобраны образцы крови для изучения основных показателей крови.

Периферическую кровь брали из поверхностных вен - латеральной голени. Пробы брали ранним утром натощак.

Анализ основных показателей крови проводили в клинико-диагностической лаборатории «Олимп» (г. Астана).

Полученные данные показали, что все показатели крови экспериментальных собак находились в физиологической норме.

Анализ результатов крови, включающий гематологические исследования, очень хорошо коррелировал с развитием инвазионного процесса. Отбор крови у животных проводили до заражения, на 10, 26, 37 дни после начала заражения.

Рассматривая общие показатели лейкоцитов в крови, то следует отметить неоднозначную картину, и варьирование значений происходит в зависимости от животного. Возможно, такое варьирование лейкоцитов в крови экспериментальных животных, связано с изменением различных типов данных клеток. Развернутый анализ крови определяет процентное соотношение лейкоцитов различных типов: нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов и моноцитов (Приложение 1). Доля некоторых из них при определенных заболеваниях организма может возрастать, а других - пропорционально снижаться. В нашем случае мы наблюдали картину, где показатели различных видов лейкоцитов варьируют при изучаемой инвазии.

Основным индикатором при постановке эксперимента, являются показатели эозинофилов, так как данный показатель всегда находится на высоком уровне и принимает активное участие в борьбе с паразитарными инвазиями. Главнейшее их свойство - это экспрессия Fc-рецепторов, специфичных для IgE. Физиологически это проявляется в мощных цитотоксических свойствах эозинофилов, и их активном участии в противопаразитарном иммунитете. Данные, полученные при изучении данного показателя в крови экспериментальных животных представлены на рисунке 6.

Рисунок 7 - Концентрация эозинофилов в крови собак

Говоря о данных представленных на рисунке. Показатели эозинофилов в крови собак на 10 день после начала заражения, резко увеличивались и были в пределах 7,9-31,3%. Также увеличение было зафиксировано и на 26 день после заражения животных, после чего данный показатель начал снижаться к 37 дню. Данные показатели являются свойственными эозинофилам в инвазионном процессе, так как большая их часть недолго остается в крови и, попадая в ткани, длительное время находится там [66, 67].

Кроме того следует отметить и повышение уровня лимфоцитов у всех экспериментальных животных уже на 10 день после заражения. Лимфоциты являются основными клетками иммунной системы организма и выделяют в кровь антитела, блокирующие молекулы антигенов и выводящие их из организма. Данный показатель, также как и вышеописанные, доказывает наличие в организме экспериментальных животных протекание инвазионного процесса.

Если же рассматривать показатели сегментоядерных нейтрофилов, то они варьировались в зависимости от животного. У трех из пяти собак наблюдается повышение данного показателя в процессе развития инвазионного процесса, тогда как у двух других собак показатели значительно снижаются.

Показатели общего содержания базофилов в крови собак также были неоднозначны. Анализ общего содержания базофилов у собак №1, 4 и 5 показал их полную противоположность по отношению к сегментоядерным нейтрофилам. Если в первом случае показатели увеличивались, то общее содержание базофилов у этих животных снижалось при длительности протекания инвазионного процесса. У собаки №3 показатели базофилов на 10 день были в норме, на 26день инвазии резко снизились, и уже на 37 день было зарегистрировано увеличение данного показателя.

Моноциты в крови животных, за исключением собаки №2, показали снижение с развитием инвазионного процесса.

Рассматривая показатели общего содержания плазмоцитов в крови экспериментальных животных, можно прийти к выводу, что у всех собак также замечено снижение данного показателя в процессе инвазионного процесса.

Таким образом, проведя развернутый анализ различных типов клеток лейкоцитов, полученных от экспериментальных животных, можно сделать вывод, что каждый тип клеток специфически реагирует на присутствие в организме животных возбудителя описторхоза и на течение инвазионного процесса.

При изучении и анализе в крови показателей тромбоцитов у первых двух опытных собак, данный показатель увеличивался в процессе инвазии, тогда как у остальных животных, данный показатель снижался.

Практически такой же результат показал и тромбокрит, отражающий долю объема периферической крови, которую занимают тромбоциты. Средний объем тромбоцита показал снижение у всех животных на протяжении проведения эксперимента.

Большие изменения в сторону увеличения общего содержания в процессе развития инвазионного процесса, показали такие показатели, как эритроциты, гемоглобин и его распределение по объему.

Как известно, эритроциты представляют собой красные кровяные тельца, которые образуются в красном костном мозге. Эритроциты содержат в своем составе гемоглобин, чья функция сводится к переносу кислорода из легких к тканям и органам, а углекислого газа обратно к легким. Распределение гемоглобина по объему при его увеличении или снижении одного из них приводит к полицитемии или анемии, соответственно. Все три показателя тесно связаны между собой и дополняют друг друга, поэтому увеличение или снижение одного из них, ведет к корреляционным изменениям остальных показателей. Изменения показателей эритроцитов и гемоглобина в крови собак в процессе инвазионного процесса, представлены на рисунке 8.

Рисунок 8 - Показатели эритроцитов в крови животных

Такие показатели, как средний объем эритроцита, распределение эритроцитов по объему, среднее содержание гемоглобина в эритроците оставались в норме с незначительными отклонениями. А вот средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах оставалась в норме на начальных этапах эксперимента повышалась только на 37 день заражения животных.

Также со значительными отклонениями был детектирован цветовой показатель крови, показывающий относительное содержание гемоглобина в эритроцитах. Наблюдается очень тесная корреляционная связь при соотношении показателей эритроцитов с гематокритом. На всем протяжении эксперимента, гематокрит увеличивается вместе с общим содержанием эритроцитов.

Динамика общего содержания гемоглобина в крови животных также повышалась, как и показатели содержания эритроцитов. Эти данные вполне коррелируют с распределением гемоглобина по объему, где также происходит повышение общих показателей.

Полученные результаты указывают на то, что при инвазировании животных возбудителем описторхоза происходит сдвиг физиологической нормы гематологических показателей крови, среди которых наиболее выражены эозинофилы, лимфоциты, эритроциты, концентрация гемоглобина и его распределение по общему объему.

Биохимические показатели крови собак, искусственно зараженных О.felineus

Кроме гематологических показателей, проводилась работа по изучению биохимических показателей крови на 50 день после заражения животных. Основным индикатором при описторхозе, являются такие показатели крови, как аланинаминотрансфераза (АЛТ), аспартатаминотрансфераза (АСТ), гамма-глутамилтранспептидаза (ГГТП), билирубин, амилаза и холестерин [68, 69]. Полученные результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Основные биохимические показатели экспериментальных животных на 50 день после заражения

Из данной таблицы видно, что по сравнению с контролем, показатели сыворотки крови экспериментальных животных отличались повышенным содержанием практически всех изучаемых параметров. Так, стоит отметить повышенное содержание в крови экспериментальных собак трансаминаз АЛТ и АСТ, ГГТП, общей амилазы и общего белка. Все эти показатели являются маркерами при диагностике заболеваний печени, в том числе и описторхоза.

Получение экскреторно-секреторного антигена

С целью обнаружения половозрелых форм гельминта исследовались желчные ходы печени и желчный пузырь.

Как показали результаты паталого-анатомического вскрытия, все подопытные животные были заражены описторхисами. Результаты количественного содержания описторхов в каждом органе представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Количество описторхов в желчном пузыре и в печени у собак, зараженных описторхозом (по результатам исследований)

Половозрелых гельминтов собирали в чашки Петри со стерильным физиологическим раствором, отмывали от крови, проверяли их активность и видовую принадлежность визуально под микроскопом при увеличении 20х10 (рисунок).

Для получения экскреторно-секреторного антигена живые мариты описторхов культивировали в неполной среде Игла в течение 72 часов. В результате сбора культуральной жидкости и ее очистки получено 45 мл экскреторно-секреторного антигена.

Характеристика иммунологических показателей на протяжении всего периода описторхозной инвазии

Тестирование специфических антител против ЭСП возбудителя проводили в непрямом варианте твердофазного иммуноферментного анализа. При этом экскреторно-секреторный антиген адсорбировали в ячейках полистистиролового планшета для иммунологических реакций («Nunc», Дания) в объеме 0,1 мл при 4°С в течение 18 часов.

После инкубации планшет отмывали три раза ЗФР с 0,05% твин-20 на аппарате StatFax 2600.

Блокировали свободные участки 1% раствором БСА. Инкубация 1 час при +37 °С. Отмывали три раза.

После этого вносили сыворотку в количестве 0,1 мл. Титрование сывороток зараженных животных проводили, начиная с титра 1:100. В качестве отрицательного контроля использовали сыворотку крови, отобранной перед заражением. Инкубация при +37 ºС в течение 60 минут. После инкубирования планшет отмывали описанным выше способом для удаления неспецифически связавшихся антител.

Затем вносили антитела против иммуноглобулинов собаки, меченных пероксидазой - антивидовой конъюгат («Sigma», США) в рабочем разведении по 100 мкл в лунку, инкубация 1 ч при 37 °С. Отмывка.

После повторяли процедуру отмывки для удаления несвязанных продуктов реакции и в лунки вносили по 0,1 мл раствора субстрата фермента, приготовленного по следующей схеме: 10 мкг 0,1% ортофенилендиамина (ОФД) («Sigma», США), 10 мкл 30% перекиси водорода. 10 мл 1% раствора лимонной кислоты с рН 4,5. Планшет инкубировали 10-15 мин в темном месте при комнатной температуре. Положительная реакция характеризуется окрашиванием раствора субстрата в желто-коричневый цвет. Реакцию останавливали добавлением в лунки планшета 0,05 мл раствора 2М серной кислоты. Результаты ИФА учитывали с помощью спектрофотометра (EXPERT-96, Австрия, 2004) при длине волны 492 нм.

Результаты проведенного исследования представлены в таблице 5.

Таблица 5 - Результаты иммуноферментного анализа специфических сывороток крови с экскреторно-секреторным антигеном

Из данной таблицы видно, что максимальные титры специфических антител против возбудителя описторхоза были выявлены на 26 день после заражения животных. После чего данные показатели резко снижаются и вновь увеличиваются только на 50 день развития инвазионного процесса. Изменения данных показателей продемонстрированы на рисунке 9.

Анализируя данный рисунок видно, что наибольшие титры антител на наблюдались у собак №2 и №3 на 26 день заражения и составили 1:6400 и 1:3200 соответственно. Наименьший титр антител был у собаки №5 и оставался на этом уровне на всех периодах исследования.

Рисунок 9 - Изменяющиеся титры антител в сыворотке зараженных собак в различные периоды инвазионного процесса

Проведенные исследования показывают, корреляцию титров специфических антител с развитием инвазионного процесса и ответ иммунной системы организма животных отвечает на развитие описторхов внутри организма.

2. ОХРАНА ТРУДА

Проблемами, связанными с обеспечением здоровых и безопасных условий труда, занимается охрана труда, которая представляет собой систему законодательных, социально-экономических, организационных, технических, гигиенических и лечебно-профилактических мероприятий и средств, обеспечивающих безопасность, сохранение здоровья и работоспособность человека в процессе труда.

В настоящее время в каждом хозяйстве, объединении, области республики имеются комплексные планы улучшения условий, охраны труда и социально-оздоровительных мероприятий. На их осуществление выделены необходимые материальные ресурсы и денежные средства, что способствует улучшению работы по охране труда [70].

Безопасность труда - состояние условий труда, при котором отсутствует производственная опасность - возможность воздействия опасных и вредных производственных факторов на работающих.

Закон Республики Казахстан «О безопасности и охране труда» регулирует общественные отношения в области охраны труда и направлен на обеспечение безопасности, сохранение жизни и здоровья работников в процессе трудовой деятельности, а также устанавливает основные принципы государственной политики в области безопасности и охраны труда [71].

При работе в лаборатории персонал пользуется специальной одеждой, предусмотренной действующими правилами и нормами (халат, косынка, маски, перчатки и т.д.)

На шкафах с препаратами дается вся опись. Согласно техники безопасности, кислоты и другие особо опасные вещества хранятся под вытяжным шкафом.

В рабочую зону лаборатории допускаются лишь сотрудники лаборатории. В рабочих зонах лаборатории не допускают пребывание детей.

В лаборатории предусмотрена система общего водоснабжения. Она оборудована запорными клапанами, препятствующими противотоку. Раковины с проточной водой размещены в каждой лабораторной комнате.

Системы безопасности включают противопожарную и электробезопасность. В лаборатории имеются огнетушители и план эвакуации при пожаре.

В лаборатории имеется достаточное пространство для безопасного проведения лабораторных процедур. Помещение лаборатории обеспечиваются достаточным освещением для проведения лабораторно-практических работ, а также анализа информации по подбору методик исследования.

При процедурах, которые могут сопровождаться прямыми или случайными контактами с контаминантами, обязательно надевают специальные одноразовые резиновые перчатки. После использования перчатки снимают и моют руки. Каждый раз после различных манипуляций, а также в конце рабочего дня работники лаборатории моют руки. При необходимости предохраняют глаза и лицо от брызг кислот, щелочей, дезинфицирующих растворов, попадания инфицированного материала и источников искусственной и ультрафиолетовой радиации, во всех случаях надевают защитные очки, марлевые или ватные повязки и другие защитные средства. Защитную одежду вне лабораторных помещений, а именно в столовой, буфете, служебных помещениях, библиотеках, комнатах персонала не носят. В лабораторной зоне не принимает пищу, не пьют, не курят. Защитная лабораторная одежда не хранится в тех же шкафчиках или ящиках, что и личная.

В лабораторных помещениях всегда поддерживается порядок и чистота. Перед работой и после рабочие поверхности подвергаются дезинфекции. После работы отработанный материал подвергается автоклавированию либо сжигается.

Таким образом, для обеспечения здоровья населения и предотвращения заражения окружающей среды лаборатория действует в соответствии с установленными внутренними правилами и инструкциями. Для улучшения охраны окружающей среды можно предложить следующие мероприятия: установление приточно-вытяжной вентиляции, обеспечить входы в лабораторию дезковриками, установить фильтры на сточные воды [72].

3. ОХРАНА ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Законодательсво Республики Казахстан об охране окружающей среды состоит из настоящего Закона и других законодательных и нормативных актов по безопасности и гигиене в производственной среде.

Настоящая база нацелена на обеспечение права работников на охрану, устанавливает особые принципы национальной поликики. В этой области в целях предупреждения несчастных случаев и ущерб здоровью на производстве, сведения к минимуму опасных и вредных производственных факторов и распространяется на все виды хозяйственной деятельности и предприятий независимо от форм собственности [73].

Все рассмотренные факторы, которым можно приписать загрязняющий эффект, оказывают существенное влияние на процессы, в биосфере. На протяжении многих десятилетий в Казахстане складывалась преимущественно сырьевая система природопользования с экстремально высокими техногенными нагрузками на окружающую среду. Поэтому заметного улучшения экологической ситуации пока не произошло, и она по-прежнему характеризуется деградацией природных систем, что ведет к дестабилизации биосферы, утрате ее способности поддерживать качество окружающей среды, необходимое для жизнедеятельности общества [74].

Проблема экологической безопасности Республики Казахстан стоит на одном из первых мест. С появлением высокоиндустриального общества, опасное вмешательство человека в природу сильно усилилось, расширился объем этого вмешательства, оно стало многообразнее и на данном этапе грозит стать масштабной опасностью для человечества [75].

Экологический кодекс Республики Казахстан (с изменениями и дополнениями по состоянию на 22.04.2015 года).

Кодекс Республики Казахстан от 09.01.2007 № 212-3 - «Экологический кодекс» разработанный сотрудниками правового отдела Министерства охраны окружающей среды, призван решить следующие важнейшие задачи:

обобщение и систематизация на законодательном уровне вопросов охраны окружающей среды;

поднятие статуса экологических требований и нормативов до уровня законодательных актов прямого действия;

внедрение международных стандартов в практику работы по охране окружающей среды в нашей стране.

Экологическое законодательство Республики Казахстан основывается

на Конституции Республики Казахстан и состоит из настоящего Кодекса и 50 иных нормативных правовых актов Республики Казахстан.

Экологический Кодекс регулирует отношения в области охраны, восстановления и сохранения окружающей среды, использования и воспроизводства природных ресурсов при осуществлении хозяйственной и иной деятельности, связанной с использованием природных ресурсов и воздействием на окружающую среду, в пределах территории Республики Казахстан [76].

Концепция экологической безопасности Республики Казахстана на 2004 - 2015 гг. Отношения в области охраны и использования объектов окружающей среды и особо охраняемых природных территорий регулируются специальными законами Республики Казахстан в части, не урегулированной настоящим Кодексом.

В целях совершенствования законодательства в республике взят курс на сближение с законодательством развитых стран и внедрение международных стандартов. Республикой Казахстан подписаны 19 международных конвенций и разработаны национальные планы действий по их реализации. Налажена система экологической экспертизы, разрешительная и контрольно-инспекционная работа.

Настоящая Концепция экологической безопасности разработана исходя из приоритетов Стратегии <jl:1008743.1%20> "Казахстан-2030" в соответствии со Стратегическим планом развития Республики Казахстан до 2010 года и с учетом основных положений Повестки дня на XXI век и принципов Рио-де-Жанейрской декларации <jl:1025922.0%20> по окружающей среде и развитию 1992 года, а также решений Всемирного саммита по устойчивому развитию в г.Йоханнесбурге (2002 год). Обеспечение оптимального уровня экологической безопасности с достижением нормативных показателей состояния окружающей среды предполагает поэтапную реализацию положений данной Концепции.

Первый этап (2004-2007 годы) - снижение уровня загрязнения окружающей среды и выработка плана действий по его стабилизации.

Второй этап (2008-2010 годы) - стабилизация показателей качества окружающей среды и совершенствование экологических требований к природопользованию.

Третий этап (2011-2015 годы) - улучшение качества окружающей среды и достижение благоприятного уровня экологически устойчивого развития общества.

Экологически безопасное развитие государства базируется на следующих принципах:

экосистемный подход к регулированию всех общественных отношений для устойчивого развития государства путем внедрения научно обоснованного комплекса ограничений, нормативов и правил ведения хозяйственной и иной деятельности, определяющих экологически допустимые пределы использования природных ресурсов и обеспечивающих сбалансированное управление качеством окружающей среды;

подчиненность региональных и локальных задач экологической безопасности глобальным и национальным целям предупреждения экологических угроз;

эколого-экономическая сбалансированность развития и размещения производственных сил (принципы экологической емкости и территориального планирования);

обязательность оценки воздействия хозяйственной и иной деятельности на окружающую среду с последующими экологической и санитарно-эпидемиологической экспертизами;

обеспечение доступа населения к экологической информации и его участия в решении экологических проблем;

партнерство в международном сотрудничестве и соблюдение норм международного права [77].

Работа по выполнению исследований проводилась в паразитологической лаборатории Казахского агротехнического университета им. С. Сейфуллина.

В лаборатории соблюдены все санитарно-эпидемиологические требования:

имеется водопровод, канализация, электроснабжение, центральное отопление и горячее водоснабжение, вентиляция;

температура воздуха в лабораторных помещениях поддерживаетя в пределах 18-21оС;

имеется естественное и искусственное освещение;

пол, стены, потолок гладкие, легко моющиеся, устойчивые к действию дезинфицирующих средств.

Строго соблюдаются все требования при работе с возбудителями
паразитарных заболеваний:

материал, подозрительный на содержание стробил, онкосфер, яиц, личинок, особей взрослых гельминтов и простейших кишечника доставляется в стеклянной или пластиковой посуде с плотно закрывающимися крышками.

подготовка и исследования на наличие гельминтов, простейших кишечника и кровепаразитов проводят в вытяжном шкафу. Лабораторная посуда для исследования с применением методов обогащения устанавливается в кюветах. Препараты, приготовленные для исследования, должны помещаться на специальные подносы, под предметные стекла с мазками подкладывают стекла больших размеров;

все манипуляции с исследуемым материалом, посудой, оборудованием проводятся в резиновых перчатках;

использованные пипетки, пробирки, капилляры, предметные и покровные стекла дезинфицируются;

материал, подозрительный на зараженность гельминтами хранится в отдельном холодильнике, который в конце рабочего дня опечатывается [78].

4. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ

Экономика - это наука, которая изучает воздействие мероприятий, обеспечивающих максимальное получение качественной продукции при наименьших затратах труда и средств на единицу продукции.

Основные задачи данной науки следующие: определение экономической эффективности мероприятий, выявление резервов повышения их эффективности, изучение экономического ущерба, причиняемого различными факторами, определение экономического эффекта, получаемого в результате внедрения достижений науки и практики в производство.

В условиях рыночных взаимоотношений значение и задачи экономического анализа эффективности биотехнологических мероприятий в животноводстве и на перерабатывающих предприятиях всех форм собственности приобретают еще большую актуальность.

При определении результатов финансово-хозяйственной деятельности предприятия или результата использования авансированного капитала принято использовать два основных понятия: экономический эффект и экономическая эффективность, разница между этими понятиями состоит в том, что эффект выражает абсолютное значение полученного результата безотносительно к затратам, которые этот результат обусловили.

Финансирование «института» осуществляется на конкурсной основе по государственному заказу за счет средств республиканского бюджета, выделенного на научно-исследовательские программы, а также грантов, спонсорской помощи, заказов отраслевых предприятий и организаций, внебюджетных средств университета, а также собственных средств, поступающих в результате реализации научно-технической продукции.

Научно-исследовательские работы выполняются на основании перспективных и годовых планов, по госбюджетным, хоздоговорным и инициативным темам. Научные направления разрабатываются исходя из его задач с учетом государственного заказа по фундаментальным и прикладным исследованиям. Исследования, выполняемые в «институте», включаются в планы научно-исследовательских работ университета.

Структурные подразделения «института» руководствуясь основными направлениями, программами и планами научно-исследовательской работы пользуются самостоятельностью в выборе тематики и методов исследования.

«Институт» проводит исследования в тесном контакте с кафедрами, факультетами университета, а также с научными учреждениями Республики Казахстан, а также министерствами и ведомствами.

Управление в «институте» осуществляется в соответствии с настоящим положением на принципах централизованного руководства.

Руководство научной деятельностью осуществляет директор, назначаемый из числа ведущих ученых университета.

Заведующие лабораториями избираются на основе конкурса или принимаются на работу по контракту, как правило, из числа докторов и кандидатов наук - специалистов в области биотехнологии и утверждаются вице-президентом по научной работе и международным связям университета.

При определении экономической эффективности, ставятся множество задач, которые необходимо решать: определение экономической эффективности ветеринарных мероприятий, выявление ре­зервов повышения их эффективности, изучение экономического ущерба, причиняемого заразными и незаразными болезнями животных, определение экономического эффекта, получаемого в результате внедрения достижений ветеринарной науки и практики в производство, содействие разработке экономически выгодных методов профилактики болезней, способов лечения животных, улучшению планирова­ния и совершенствованию организации ветеринарного дела.

При определении экономической эффективности, ставятся множество задач, которые необходимо решать: определение экономической эффективности ветеринарных мероприятий, выявление ре­зервов повышения их эффективности, изучение экономического ущерба, причиняемого заразными и незаразными болезнями животных, определение экономического эффекта, получаемого в результате внедрения достижений ветеринарной науки и практики в производство, содействие разработке экономически выгодных методов профилактики болезней, способов лечения животных, улучшению планирова­ния и совершенствованию организации ветеринарного дела.

Таким образом, из определения экономической эффективности можно сформулировать две основные задачи: прямую - достижение максимального эффекта при заданном уровне затрат (что чаще всего обуславливается ограниченностью ресурсов) и обратную - достижение заданного эффекта при минимальных затратах. Каждому предприятию за время своей деятельности приходиться решать, как ту, так и другую задачу.

Для целей экономического планирования и экономического анализа, несомненно, больший интерес представляет экономическая эффективность.

Экономическая эффективность лаборатории. При расчетах показателей экономической эффективности на уровне предприятия производится расчет и анализ следующих результатов:

производственные результаты выручка от реализации производственной продукции, за вычетом израсходованной на собственные нужды;

В состав затрат при этом включается только единовременные и текущие затраты предприятия без повторного счета (в частности, не допускается одновременный учет единовременных затрат на создание основных средств и текущих затрат на их амортизацию). Вместе с тем, степень удовлетворения потребительского спроса зависит не только от количества производимой продукции, но и от ее качества. В ряде случаев повышение качества продукции равнозначно увеличению производства препаратов. Улучшение качества продукции является необходимым условием более полного удовлетворения рыночного спроса.

При проведении экспериментальной работы по исследованию сывороток крови собак на предмет выявления специфических антител к исходному антигену, я использовал методы иммуноферментного анализа (ИФА) и реакцию иммунодиффузии (РИД). Поэтому можно сравнить эти два метода между собой по эффективности и подсчитать материальные затраты на проведение каждого анализа из расчета исследования одной пробы.

Таблица 6 - Затраты на проведение ИФА

Таблица 7 - Затраты на проведение РИД

Из приведенных выше таблиц с затратами на одну и другую реакцию видно, что на проведение ИФА было затрачено всего 331 тенге, а на проведение исследований 1-й пробы методом РИД было затрачено 316 тенге. Таким образом, постановка реакции иммунодиффузии является более выгодным экономически. Однако, если учесть другие составляющие: скорость получения результата (ИФА - 3 часа, РИД -24 -72 часа) и специфичность (по литературным данным считается, что ИФА на 20-30% более точный метод), то эти факты являются более значимыми. Из этого мы можем сделать вывод: ИФА является предпочтительным тестом, чем реакция иммунодиффузии, поскольку позволяет получить быстрый и точный результат.

ВЫВОДЫ И ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Основные гематологические и биохимические показатели с высокой долей вероятности способны показать наличие инвазионного процесса в организме животных. Заражение описторхозом вызывает повышение в крови таких показателей, как общее содержание эозинофилов, лимфоцитов, эритроцитов, концентрации гемоглобина, трансаминаз АЛТ и АСТ, ГГТП, общей амилазы и общего белка.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1.      Кривцова О.В. Кислотообразующая функция желудка и элементный состав желчи у больных хроническим описторхозом в сочетании с гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью: автореф. на соиск. учен. степ. канд. мед. наук (14.00.05) / Кривцова Ольга Владимировна; Государственное учреждение "Научно-исследовательский институт питания РАМН". - Москва, 2005. - С. 122.

.        Плотников Н.Н. Описторхоз (гельминтоз печени и поджелудочной железы). - М: Издательство АМН СССР, 1953.

3.      Описторхоз [Электронный ресурс] // Информационный ресурс «Ordo Deus». - Режим доступа: <http://www.ordodeus.ru/Ordo_Deus12_Opistorhoz.html%20>

.        Васильков Г.В. Паразитарные болезни рыб и санитарная оценка рыбной продукции. - М: Издательство ВНИРО, 1999. - С. 191.

.        Филимонова Л.А., Борисенко Н.А. Описторхоз, клинические проявления // Сибирское медицинское обозрение. - Т.39 - №2. - 2006. - С. 8-12.

.        Григорьева И.Н. Описторхоз: традиции и инновации // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - №4. - 2012. - С. 54-59.

.        Кузнецова В.Г. Описторхоз в клинической практике врача-инфекциониста / В.Г. Кузнецова, Е.И. Краснова, Н.Патурина // Лечащий врач. - 2013. - №6. - С. 74-78.

.        Бакштановская И.В. Эффект терапии на биохимические показатели функции печени при описторхозе / Степанова Т.Ф., Шонин А.Л. и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2003. - №2. - С. 10-Горохов В.В. // Тр. Всерос. ин-та гельминтол. - 1994. - Т. 34. - С. 17- 25.

.        Пельгунов А.Н. Паразиты человека. Описторхоз // Экологические системы и приборы. - 2006. - № 5. - С. 21-26.

.        Кусаинова А.С. Эпидемиологические особенности описторхоза на современном этапе: автореф. … канд. мед. наук: 14.00.30. - Караганда, 2010. - С. 22.

11.    Sithithaworn P., Haswell-Elkins M. Epidemiology of Opisthorchis viverrini // Acta Trop. - 2003. - Vol. 88. - P. 187-194.

12.    Кереев Я.М., Нуржанова Ф. Х. Обзор результатов исследований описторхоза в Западно-Казахстанской области // Наука и образование. - 2012. - № 1 (26). - С. 80-82.

.        Кереев Я.М., Шалменов М.Ш. и др. Эколого-биологические основы функционирования описторхоза в Урало-Кушумской оросительно-обводнительной системе Западно-Казахстанской области // Современные проблемы экологии и устойчивое развитие общества: мат. междунар. науч.-практ. конф., Алматы. - 2010. - С. 181-183.

.        Гершун В.И., Ковалёва Т.И. Результаты ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы на описторхоз в некоторых водоёмах Костанайской обасти Республика Казахстан // Perspektywiczne opracowania są nauką i technikami - 2012: materiały VIII międzynarodowej naukowi-praktycznej konferencji 07-15 listopada 2012 roku. - Przemyśl: Nauka I studia. - 2012. - Vol. 15. - С. 75-77.

.        Гламаздин И.Г., Гармаш С.И., Панюшкин А. Клинико-иммунологическая характеристика некоторых гельминтозов собак // Российский паразитологический журнал. - 2009. - №3. - С. 85-87.

.        Попов О.В. Гельминтозы и профилактика пироплазмоза собак в регионе Кавказских Минеральных Вод: автореф. на соиск. учен. степ. канд. вет. наук (03.02.11) / Попов Олег Владимирович; ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет». - Ставрополь, 2013. - С. 26.

.        Мазихова А. М., Беккиева С. А., Юсупов А. О., Чилаев С. Ш. Влияние трематодозных инвазий на морфологический состав крови крупного рогатого скота // Вестник Красноярского государственного аграрного университета. - 2009. - №4. - С. 163-164.

.        Шонин А.Л. Описторхоз. Материалы лекции для врачей. / А.Л. Шонин. - С. 8, 13-14.

.        Пономарева A.M. Разработка новых методов иммунодиагностики описторхоза и опыт применения в клинике: автореф. дис. канд. биол. наук / A.M. Пономарева. - М., 1981. - С. 27.

.        Хордикова, С.А. Псориаз и описторхоз: морфогенез гастроинтестинопатии / С.А. Хордикова, Э.И. Белобородова, П.Н. Пестерев. - М., 2003. - С. 34-35

.        Паразитология и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных. - М.: «Колос», 1982. - С. 464

.        Зайцев Н.Я. Изучение токсического и сенсибилизирующего влияния аскаридий на организм цыплят: автореф. на соиск. учен. степ. канд. вет. наук, Москва, 1970. - С. 18.

.        Кудрявцев A.A. Изучение вопросов биологии Toxascaris leonina // Гельминты человека, животных и растений на Южном Урале: В 2-х ч. Уфа. - 1974. - Ч.1. - С. 124-132.

.        Данияров С.Б., Гарифьян А.Г., Эсенбекова З.Э., Рябова О.В. Физиология крови: методическое пособие к практическим занятиям по нормальной физиологии / Кыргызско-Российский Славянский университет. - Бишкек: Издательство Славянского университета, 2000, - С. 2-3, 13-19.

.        Воробьева, Е.А. Анатомия и физиология / Е.А. Воробьева, А.В. Губарь, Е.Б. Сафьянникова. - М.: Медицина, 1988. - С. 432.

.        Кудрявцев А.А., Кудрявцева Л.А. Клиническая гематология животных. - М.: Колос, 1974, - .С. 399.

.        Бажибина Е.Б., Коробов А.В. и др. Методологические основы оценки клинико-морфологических показателей крови домашних животных: учебное пособие / Бажибина Е.Б., Коробов А.Н., Середа С.В., Сапрыкин В.П. М.: Аквариум, 2004, - С. 126.

.        Соколов А.Ю. Подсчет ретикулоцитов и определение связанных с ними параметров с помощью анализаторов серии LH компании Beckman Coulter Inc. // Лабораторная медицина. - 2008. - №9. - С. 85.

.        Трунова С.А. Фауна, биология, экология гельминтов собак в равнинном поясе Дагестана, совершенствование мер борьбы: автореф. на соиск. учен. степ. канд. биол. наук (03.00.19.) / Трунова Саният Акаевна; ГНУ «Всероссийский НИИ гельминтологии им. К.И.Скрябина (ВИГИС)» - Москва, 2009. - С. 21.

.        Колесников В.И., Попов О.В. Паразитозо-хозяинные отношения при моно- и микстиинвазии и их клиническое проявление // Сборник научных трудов СНИ-ИЖК «Животноводство и кормопроизводство». - 2012. - Т.1 - №5. - С. 75-79.

.        Шинкаренко А.Н. Вопрос экологии паразитов собак и меры борьбы с вызываемыми ими заболеваниями в Нижнем Поволжье: автореф. на соиск. учен. степ. доктора вет. наук (03.00.19) / Шинкаренко Александр Николаевич; ФГОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия» - Иваново, 2005. - С. 53.

.        Польшкова Е.В. Эффективность и безвредность применения новых лекарственных средств при гельминтозах собак: автореф. на соиск. учен. степ. канд. вет. наук (03.00.19.) / Польшкова Екатерина Владимировна; ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельхоз. академия» - Нижний Новгород, 2005. - С. 21.

.        Зиновьева А.В. Состояние системы свертывания крови при хроническом описторхозе в условиях эндогенной и экзогенной тромбинемии: автореф. на соиск. учен. степ. канд. биолог. наук (03.03.01) / Зиновьева Альбина Валерьевна; ФГБОУ ВПО «Челябинский государственный педагогический университет» - Челябинск, 2012. - С. 23.

.        Поликутин Н.В. Патогенез при описторхозе у кошек / Поликутин Н.В., Шинкаренко А.Н. // Известия Нижеволжского агроуниверситетского комплекса: наука и высшее профессиональное образование. - 2008. - №4. - С. 93-96.

.        Шибитов С.К. Описторхоз плотоядных животных в условиях Западной Сибири: автореф. на соиск. учен. степ. канд. вет. наук (03.02.11) / Шибитов Самат Карабаевич; ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И.Скрябина» - Москва, 2013. - С. 24.

.        Назаренко Г.И., Кишкун А.А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. - М: Медицина 2007, С. 118, 147, 146, 157-163, 168, 170, 172.

.        Гламаздин И.Г., Гармаш С.И., Панюшкин А. Клинико-иммунологическая характеристика некоторых гельминтозов собак // Российский паразитологический журнал. - 2009. - №3. - С. 85-87.

.        Анников В.В., Чермошенцева Г.В. Клинико-биохимическая оценка эффективности применения препарата гамавит форте при лечении собак, больных бабезиозом с гепатопривным синдромом // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. - 2011. - №1. - С. 19-23.

.        Шульц Р.С., Давтян Э.А. // Материалы научной конференции Всесоюзного общества гельминтологов. - Москва, 1969. - Ч. 2. - С. 75-116

.        Борзунов В.М. Протозойные инвазии и гельминтозы человека / В.М. Борзунов, В.К. Веревщиков, Г.И. Донцов, Л.И. Зверева, П.Л. Кузнецов. - Екатеринбург: Уральская государственная медицинская академия, 2004 г. - С. 175.

.        Шевкопляс В.Н., Лопатин В.Г. Влияние гельминтозов на течение иммунологических процессов у животных // Российский паразитологический журнал. - 2008. - №4. - С. 94-101.

.        Лейкина Е.С. Иммунитет при гельминтозах / В книге Основы общей гельминтологии - Ч. III. - М.: Наука, 1976. - С. 89-169.

.        Озерецковская Н.Н. Современные проблемы терапии гельминтозов // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1975. - № 3. - С. 271-276.

.        Шульц Р.С. Гвоздева Е.В. // Сборник работ по гельминтологии к 60-летию со дня рождения проф. Р.С. Шульца. - Алма-Ата, 1976. - С. 22-47.

.        Лаврентьева Н.Н. Гельминтозы: учебное пособие - Челябинск, 2010. - С. 59.

.        Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. - М.: Издательство "Высшая школа", 1991. - С. 3-4.

.        Борисенко Н.А., Нечепуренко И.С., Жукова Л.В. Клинические особенности течения описторхозов по материалам стационаров г. Красноярска // Акт. вопросы охраны здоровья и организации мед. помощи населению: сб. науч. тр. - Красноярск, 1997. - С. 91.

.        Зубов Н.А. К патоморфозу при описторхозе // Мед. паразитол. и паразит. болезни. - 1996. - №2. - С. 23-26.

.        Мигдалович М.Г. Клиническое значение иммунорегулирующей функции нейтрофилов крови больных описторхозом до и в динамике после лечения билтрицидом: автореф. дис. … канд. мед. наук. - Челябинск, 1995. - С. 172.

.        Яковлева В.В., Кальгина Г.А., Постникова Т.Ф. и др. Анализ клинико-иммунологических показателей у больных хроническим описторхозом в ранние сроки после антигельминтозной терапии // Сибирск. журн. гастроэнтерол. и гепатол. - 1995. - № 1. - С. 61.

.        Карбышева Н.В., Султанов Л.В., Белых С.И. Мак Косланд К., Оганова Э. Динамика показателей иммунной системы при хроническом описторхозе в зависимости от проводимого лечения //

.        Функционально-морфологическое состояние печени при хроническом описторхозе / Тун М.А., Белобородова Э.И., Юшкова Г.И. и др. // Терапевт. Архив. - 1991. - №11. - С. 63.

.        Кулага В.В., Романенко И.М. Аллергические заболевания кожи. - Киев: Здоровье, 1997. - С. 178.

.        Парфенов С.Б. Особенности течения описторхоза и иммунного статуса больных из разных контингентов населения очага как основа разработки дифференцированного подхода к лечению: дис. … канд. мед. наук. - М., 1990. - С. 157.

.        Пыцкий В.И., Андрианова Н.В., Артомасова А.В. Аллергические заболевания. - М.: Медицина, 1991. - С. 366.

56.    Kaewpitoon N., Kaewpitoon S., Pengsaa P., Sripa B. Opisthorchis viverrini: The carcinogenic human liver fluke // World Journal of Gastroenterology. - 2008. - 14 (5). - С. 666-674.

57.    Долбин Д.А., Лутфуллин М.Х., Тюрин Ю.А. Специфичность копроскопических методов выявления яиц Opicthorchis felineus и Ascaris lumbricoides // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана - 2010. - №201. - С. 29-33.

.        Лавушева С.Н., Мурзатаев М.М. Система крови. Сердечно-сосудистая система. 2010. - С. 54.

.        Котелкин А.Т., Разумов И.А., Покровская И.В., Локтев В.Б. сравнительное изучение соматического, экскреторно-секреторного и яичного антигенов Opisthorchis felineus // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1997. - №1. - С. 12-16.

60.    Novitskii V.V., Riazantseva N.V. et al. Change in the production of key cytokines for regulation eosinophilic granulocytes in Opisthorchis felineus invasion // Klin Lab Diagn. - 2008. - Vol. 2. - P. 38-42.

61.    Litvinova L.S., Riazantseva N.V. et al. Dysregulation of cooperative interactions of immunocytes and eosinophils in the mechanism of development of eosinophilia in Opisthorchis felineus invasion // Med Parasitol (Mosk). - 2008. - Vol. 3. - P. 13-17.

62.    Bakshtanovskaia I.B., Stepanova T.F. et al. Analysis of a complex of biochemical parameters of hepatic function in opisthorchiasis // Med Parasitol (Mosk). - 2005. - Vol. 4. - P. 18-21.

63.    Bakshtanovskaia I.B., Stepanova T.F. et al. Impact of anthelminthic therapy for opisthorchiasis o the biochemical parameters of hepatic function // Med Parasitol (Mosk). - 2003. - Vol. 2. - P. 10-15.

.        Кухар Е.В. Распространение, методы диагностики и лечения микроспории плотоядных в Акмолинской области // Мат. межд. научно-практич. конф. «Сохранение окружающей среды - важнейшая проблема современности». Ч. 2. - Орал. 2005. - С. 315-319.

.        Голубев. А. И Экономическая теория. М.: 1987. С 45-46.

.        Челноков А.А., Ющенко Л.Ф. Охрана труда. - М.: Высшая школа, 2009. - С. 86.

.        Экологический кодекс РК от 9.01.2007 //Казахстанская правда. - 2007. - 23 янв. - №12 (25257).

.        Вестник «Экологическая версия». Алматы, 2000 год.

.        Байсалов С.Б. Природа и закон. Алма-Ата, 1996 г., - С. 133.

.        Концепция экологической безопасности Республики Казахстан на 2004-2015 годы.

.        Санитарно-эпидемиологические правила и нормы "Санитарно-эпидемиологические требования к устройству и условиям работы микробиологических, вирусологических и паразитологических лабораторий" от 21 января 2004 года №63.