GGC↑C. Условия рестрикции были следующими:
x SE Буфер O, BSA (100 мкг/мл);
После рестрикции образуется фрагмент, длиной около 400 п.н.
Молекулярно-генетическая идентификация линий мягкой пшеницы из коллекции КНИИСХ, устойчивых к листовой ржавчине
Ген Lr39(Lr41) передан в мягкую пшеницу от Ae. Tauschii Coss. (= Ae. Squarrosa L., Triticum tauschii (Coss.) Schmal.). Источником этого гена являются несколько образцов Ae. Tauschii различного географического происхождения. С использованием одного из них была получена линия пшеницы KS86WGRC02. Ген Lr39 у этой линии картирован в коротком плече хромосомы 2D и сцеплен с SSR-маркером Xgwm210 [Raupp et al., 2001; Singth et al., 2004].
Вторым источником этого гена является линия пшеницы KS90WGRC10, получившая ген устойчивости от другого образца Ae. Tauschii. Изначально предполагалось, что эта линия несет ген, отличный от Lr39 и локализованный в хромосоме 1D [Cox et al., 1994]. Новому гену был присвоен символ Lr41. Однако в дальнейшем с использованием гибридологического анализа и молекулярных маркеров S. Singh с соавторами (2004) показали, что линии KS86WGRC02 и KS90WGRC10 имеют один и тот же ген.
В коллекции Lr-линий ВИЗР имеются оба образца с геном Lr39. В результате ежегодной полевой и лабораторной оценки линия KS90WGRC10 характеризовалась как высоко устойчивая [Гультяева, 2012].
В лаборатории КНИИСХ нами с помощью специальных цитологических методов была получена геномно-добавленная форма T. migushovae, содержащая в себе генетический материал Ae. tauschii и T. timopheevi, на основе которой были созданы интрогрессивные линии мягкой пшеницы.
По результатам ПЦР-анализа в лаборатории биотехнологии КНИИСХ маркер гена Lr39 был идентифицирован в высоко-устойчивых к листовой ржавчине линиях 1731 и 1755.
Рисунок 3 - Электрофорез. М - маркер длины, 1 - Tr. Migushovae, 2-24 - линии.
Ген Lr50 перенесен в мягкую пшеницу от Triticum Timopheevii subsp. armeniacum и локализован в длинном плече хромосомы 2В. Источником этого гена являются несколько образцов дикого вида, с использованием которых созданы беккросные линии на основе трех сортов озимой мягкой пшеницы [Brown-Guedira et al., 2003]. В связи с этим несколько линий с геном Lr50 (U2657 (Karl92*3/TA874), KS96WGRC36 (TAM 107*4/ TA 870) и U3193 (TAM 107*4/TA874) рекомендованы для селекции в качестве доноров и используются при анализе вирулентности P. triticina. Ген описан как частично эффективный в Северной Америке и России [Brown-Guedira, Singh; Гультяева и др., 2009].
В условиях лаборатории отдела биотехнологии КНИИСХ передача гена Lr50 в интрогрессивные линии осуществлялась с помощью геномно-добавленной формы T. migushovae.
В литературе описано два микросателлитных маркера гена Lr50. В ходе работы нами был использован маркер Xgdm87.
По результатам ПЦР-анализа в лаборатории биотехнологии КНИИСХ маркер гена Lr 50 был выявлен в линиях 449, 569, 763, 828, 899, 1417, 1731, 1741, 1897, 643.
Ген Lr9 передан мягкой пшенице от Aegilops umbellulata Zhuk. и локализован в длинном плече хромосомы 6B [Sears, 1961]. Первые сорта с Lr9 созданы в 60-70-х годах прошлого столетия в США. Ген Lr9 массово включали в селекционные программы во многих странах, в том числе и в России. Этот ген наиболее часто встречается в яровых сортах, выращиваемых в Поволжье, на Урале и Западной Сибири. Среди сортов, включенных в Государственный реестр селекционных достижений и рекомендуемых к возделыванию в РФ, доля носителей Lr9 составляет 9% [Гультяева, 2012].
Рисунок 4 - Электрофорез. М - маркер длины, 1 - Tr. Migushovae, 2-24 - линии.
До недавнего времени ген Lr9 относился к группе высокоэффективных во всем мире. Выращивание сортов с ним предопределило появление вирулентных изолятов гриба, которые впервые были отмечены в США в 1971 г. спустя четыре года с начала массового возделывания [McIntosh et al., 1995]. В настоящее время вирулентность к гену Lr9 отмечается как в регионах выращивания сортов с этим геном, так и за их пределами. В России ген Lr9 утратил эффективность в Западной Сибири [Мешкова и др., 1998]. В современной селекции ген Lr9 рекомендуется использовать в сочетании с другими высокоэффективными Lr-генами, например, Lr24 [Gupta etl al., 2010].
Исходя из своих родословных, можно сделать вывод о том, что полученные нами в лаборатории биотехнологии КНИИСХ интрогрессивные линии могут содержать известные гены устойчивости к листовой ржавчине Lr9 от Ae. umbellulata.
На сегодняшний день ген Lr9 является единственным известным геном устойчивости к листовой ржавчине, переданным в мягкую пшеницу от Ae. umbellulata. Данный ген является высокоэффективным в некоторых странах Европы, в том числе и в России [Zhemchuzina, Kurkova, 2010]. Молекулярный маркёр, сцепленный с Lr9, находится на расстоянии 8 сМ от гена; длина соответствующего ему фрагмента амплификации составляет 1100 п.н. [Schachermayr et al., 1994].
Интрогресивные линии с генетическим материалом Ae. umbellulata были созданы путём скрещивания геномно-замещённой формы Авролата с исходным сортом пшеницы Аврора [Давоян и др., 2004]. Для идентификации маркёра, сцепленного с Lr9, были отобраны 21 линия. Все линии были устойчивы к листовой ржавчине, тип реакции некоторых из них представлены в таблице 3. В 21 проанализированной линии маркера, сцепленного с геном с Lr9, выявлено не было (рисунок 5).
Рисунок 5 - Продукты амплификации с использованием пары праймеров FJ13/1 и RJ13/2 к диагностическому маркеру, сцепленному с геном устойчивости к листовой ржавчине Lr9: 1 - маркер длины; 2 - Кавказ; 3 - Аврора; 4 - линия TcLr9; 5 - Авролата; 6-26 - линии пшеницы с генетическим материалом Ae. umbellulata.
В настоящее время известно о передаче генов Lr35, Lr36, Lr47, Lr51 от вида Ae. speltoides [McIntosh et al., 2005].
Для передачи пшенице от диких сородичей генов устойчивости к болезням и других положительных признаков в лаборатории цитогенетики Краснодарского НИИСХ был разработан подход по перестройке генома мягкой пшеницы. Путём замещения генома твёрдой пшеницы на геномы ААВВ мягкой, был получен тетраплоидный компонент сорта Аврора [Жиров, Терновская, 1984]. С использованием полученного тетракомпонента, были созданы синтетические геномно-замещённые форма и Авродес, у которых геном D мягкой пшеницы был замещён геномом S Aе. speltoides. Используя эти формы, были получены интрогрессивные линии озимой мягкой пшеницы, характеризующиеся устойчивостью к болезням, высоким содержанием белка и другими интересными для селекции морфо-биологическими признаками.
Ген Lr35 передан мягкой пшенице от Ae. speltoides Tausch. и локализован в длинном плече хромосомы 2B. В одной транслокации с ним на расстоянии 3 cM находится ген Sr39 [Kerber, Dyck, 1990]
Ген описан как высоко эффективный в Западной Европе, США и Канаде [Mesterhazy et al., 2000] В полевых условиях Пушкинских лабораторий ВИР в 2002-2011 гг. пораженность линии Тэтчер с геном Lr35 колебалась от 0 до 50% [Гультяева, Баранова, 2010].
Образцы с генами Lr35 и Sr39 представляют особую значимость для использования в селекционных программах, поскольку, кроме устойчивости к бурой ржавчине, они не поражаются расой стеблевой ржавчины Ug99. В мировой практике нет примеров использования данной транслокации в коммерческих сортах пшеницы [McIntosh et al., 1995], поскольку в гей также присутствуют гены, обуславливающие хозяйственно-негативные признаки.
R. Mago с соавторами (2009) с использованием цитологических и молекулярных методов создали линию с укороченным сегментом транслокации, которая в настоящий период рекомендуется для использования в качестве донора этих генов.
В России также имеются примеры передачи устойчивости к бурой ржавчине от Ae. Speltoides. И.Г. Одинцова и соавторы (1991) в 1983-1988 гг. смогли получить устойчивые интрогрессивные линии от скрещивания и беккросирования мягкой пшеницей комплексно устойчивого амфидиплоида AD T, dicoccum x Ae. speltoides. Устойчивость линий к бурой ржавчине позволяет предположить участие в их контроле материала Ae. speltoides, т.к. коллекция T. dicoccum не содержит имунных фор, характерных для полученного интрогрессивного материала. С использованием иммунологического, цитологического и генетического методов было показано, что ряд устойчивых линий цитологически стабильны. Ген устойчивости у некоторых линий сцеплен с гаметоцидным геном, переданным от Ae. speltoides. Другая часть линий имела тот же ген устойчивости, но без гаметоцидного гена [Одинцова и др, 1991]. Эти линии получили массовое использование во многих селекцентрах б. СССР, поскольку имели комплексную устойчивость к бурой и стеблевой ржавчинам, а также к мучнистой росе. Следовательно, мареры генов устойчивости, переданных пшенице от Ae. speltoides, актуальны для скриннинга Lr-генов в России.
Рисунок 6 - Продукты амплификации с использованием пары праймеров BCD260F1 и 35R2 к диагностическому маркеру, сцепленному с геном устойчивости Lr35: 1 - маркер длины; 2 - Аврора; 3 - линия TcLr35; 4 - Авродес; 5-26 - линии пшеницы с генетическим материалом Ae. speltoides (26 - линия Р771).
В мировой литературе описано пять маркеров генов Lr35/Sr39. В данной работе использовался маркер BCD260F1/35R2 для скриннинга 22 устойчивых интрогрессивных линий мягкой пшеницы.
По результатам ПЦР-анализа, проведённого в лаборатории биотехнологии КНИИСХ, в высоко устойчивой линии Р771 был идентифицирован маркер гена Lr35.
Фрагмент хромосомы 7S#1с геном Lr 47 перенесен в мягкую пшеницу от Ae. speltoides и локализован в коротком плече хромосомы 7А [Dubcovsky et. al., 1998]. Ген относится к группе высокоэффективных во многих странах, в том числе и России [Helguera et al., 2000; Zhemchuzhina, Kurkova, 2010; Shabnam et al., 2011]. Источником этого гена у мягкой пшеницы является яровой сорт Pavon. Этот сорт широко используется в MAS-селекции в Австралии и Франции [Gupta et al., 2011]. В лаборатории КНИИСХ источником этого гена являются интрогрессивные линии, полученные с помощью синтетической геномно-замещённой формы Авродес. Ген Lr47 представляет потенциал для селекции в России.
ПЦР-маркер PS10 (праймеры PS10R и PS10L) создан на основе RFLP-маркера Xabc465, локализованного в 7S#1 транслокации, переданной пшенице от T. speltoides. Специфичность ПЦР-маркера оценивали с использованием 166 беккросных растений пшеницы, полученных на основе пяти образцов T. speltoides. Выявлено, что продукт амлификации размером 282 п.о. присутствовал только у образцов, имеющих также фрагмент рестрикции после гибридизации с RFLP-маркером. Был сделан вывод, что нуклеотидная последовательность маркера pS10 гомологична определенному участку хромосомы 7S T. speltoides, несущему ген Lr47, и маркер PS10 может быть рекомендован для его идентификации [Helguera et al., 2000].
В ходе ПЦР-анализа, проведённого нами в лаборатории биотехнологии КНИИСХ ни в одной из 22 линий не было идентифицировано маркера, сцепленного с геном Lr47.
Рисунок 7 - Продукты амплификации с использованием пары праймеров PS10R и PS10L к диагностическому маркеру, сцепленному с геном устойчивости Lr47: 1 - маркер длины; 2 - Аврора; 3 - образец № 3256; 4 - Авродес; 5-26 - линии пшеницы с генетическим материалом Ae. speltoides.
Ген Lr 21 передан в мягкую пшеницу от Ae. Tauschii Coss. (= Ae. squarrosa L., Triticum tauschii (Coss.) Schmal.) и локализован в коротком плече хромосомы 1D. L. Huang и B.S. Gill (2001) показали, что ген Lr40, ранее идентифицированный у линии KS89WGRC07, идентичен с Lr21. Ген Lr21 относится к группе высокоэффективных в США и Канаде [Kolmer et al., 2010]. В западной Европе пораженность линии TcLr21 варьировала от 0 до 100% по годам и по странам [Mesterhazy et al., 2000; Lind, Gultyaeva, 2007; Hanzalova et al., 2008]. При многолетнем анализе популяций P. triticina из различных регионов России мы ежегодно наблюдали высокие значения частот вирулентности к гену Lr21 [Гультяева, Баранова, 2010]. Однако в полевых условиях Северо-западного региона интенсивность поражения линий TcLr21 и KS89WGRC07 в период 2002-2011 гг. не превышала 30%.
Ген Lr21 не нашёл применения в мировой селекции несмотря на то, что является одним из первых генов, интродуцированных в мягкую пшеницу от Ae. tauschii. Известен только один сорт AC Cora, созданный с его участием.
Несмотря на ограничение в использовании этого гена в селекции он является одним из наиболее изученных. Среди 67 известных Lr-генов только три (Lr1, Lr21, Lr34) клонированы и выявлено, что гены Lr1 и Lr21 относятся к NBS-LRR-классу (гены устойчивости, кодирующие белки с сайтом связывания нуклеотидов и регионом обогащенных лейцинов повторов) [Huang et al., 2003]. Это наиболее многочисленная группа клонированных к настоящему времени генов устойчивости растений.
Для идентификации гена Lr21 предложено 2 ПЦР-маркера: D14 и Lr21F/R. Оба этих маркера созданы на основе идентичного RFLP-маркера, конвертированного в CAPS и STS-маркеры. Для их амплификации используют общий прямой и различные обратные праймеры. Эффективность обоих маркеров подтверждена при анализе линий, созданных с использованием образцов Ae. tauschii различного географического происхождения [Talbert et al., 1994; Huang, Gill, 2001].
В данной работе был использован маркер D14. Молекулярный вес продукта амплификации у образцов с геном Lr21 при использование праймеров на маркер D14 составляет 885 п.о. Однако для идентификации маркера гена Lr21 при использовании данного маркера перед постановкой электрофореза требуется гидролиз продукта амплификации эндонуклеазой рестрикции MSP I [Huang, Gill, 2001].
В ходе амплификации и рестрикции, проведённой в лаборатории отдела биотехнологии КНИИСХ ни в одной из исследуемых линий не было найдено маркера к гену Lr21.
Ген устойчивости к листовой ржавчине Lr51, ранее известный как LrF7, был передан в пшеницу от T. speltoides [Dvorak, 1977]. Lr51 локализован на транслокации хромосомы 1B мягкой пшеницы. В полевых испытаниях на устойчивость к расе 5 P. triticina J. Dvorak показал, что растения, гомозиготные по Lr51, являются высокоустойчивыми, в то время как гетерозиготы показали достаточно низкий уровень устойчивости с небольшими пустулами, окружёнными некрозами и хлорозами [Dvorak, 1977].
Рисунок 8 - Продукты рестрикции с МSР1 амплифицированных фрагментов, полученных с использованием праймеров D14/L, D14/R к маркеру сцепленному с геном устойчивости Lr21. 1 - маркер длины; 2-4 T.migushovae, 5- Безостая 1, 6- Лавина, 7, 15 - Тс Lr21, 8-13 - линии полученные с участием T. migushovae, 14 - Ae. taushii. (2423)
Для идентификации гена Lr51 был разработан CAPS маркер к гену AGA7, сцепленным с транслокацией от T. speltoides, содержащей ген Lr51. Праймеры S30-13L и AGA7-759R были разработаны преимущественно для амплификации аллелей AGA7 B и S генома. В ходе амплификации и рестрикции маркера, сцепленного с геном Lr51, не было идентифицировано в синтетических формах, следовательно, в линиях его тоже нет.
Не смотря на то, что в высокоустойчивых линиях, полученных с использованием генетического материала Ae. Umbellulata не было обнаружено маркера, сцепленного с геном Lr9, все линии оказались высокоустойчивыми в полевых условиях. Так как на данный момент известно о передаче лишь одного гена устойчивости в мягкую пшеницу от Ae. umbellulata, то мы предполагаем, что в наши линии были переданы новые, ещё не описанные в литературе, гены устойчивости к листовой ржавчине. Поэтому в дальнейшем планируется продолжить исследование этих линий. Однако также существует небольшая вероятность того, что могла произойти мутация в маркере, и потому мы не смогли его обнаружить.
Рисунок 9 - продукты рестрикции с PST1 амплифицированных фрагментов, полученных с использованием праймеров S30BL, AGA7-759R к маркеру сцепленному с геном устойчивости Lr 51. 1 - маркер длины; 2-3 - образцы Ae. speltoides (2716, С4), 4-5 - Авродес, 6-17 - линии с генетическим материалом Ae. speltoides
Лишь в одной из линий, полученных с использованием генетического материала Ae. speltoides, был обнаружен маркер, сцепленный с геном устойчивости Lr35. Однако, остальные линии, не смотря на отсутствие маркеров генов устойчивости, в полевых условиях оказались не восприимчивыми к бурой ржавчине. К сожалению, в нашем распоряжении не имеются пока что праймеры к маркерам всех известных описанных в литературе генов устойчивости к листовой ржавчине, переданных от Ae. speltoides в мягкую пшеницу. Поэтому мы предполагаем, что в интрогрессивные линии мягкой пшеницы были переданы те гены, проверить наличие которых мы не в состоянии. Также мы предполагаем, что в наших линиях могут быть иные, ещё не описанные в литературе, гены устойчивости к листовой ржавчине.
Наличие гена Lr50 в интрогрессивных линиях мягкой пшеницы, показавших восприимчивость к листовой ржавчине в полевых условиях, скорее свидетельствует о том, что этот ген не является эффективным в условиях Краснодарского края и не дает устойчивость к местным расам возбудителя. Также данный результат можно объяснить феноменом пенетрантности, то есть зависимости фенотипического проявления гена от генетического окружения. То есть, в данных линиях могут присутствовать гены, которые подавляют эффект гена Lr50.
ржавчина болезнь пшеница молекулярный
Заключение
Данная квалификационная работа является частью исследований лаборатории биотехехнологии КНИИСХ по теме молекулярно-генетическая идентификация линий мягкой пшеницы, устойчивых к листовой ржавчине.
Подробно рассмотрена та часть этих многолетних исследований коллектива лаборатории, в которой принимал участие автор.
По результатам проведенных исследований обоснованы следующие выводы:
). Из исследованных 70 интрогрессивных линий мягкой пшеницы в полевых испытаниях устойчивость к листовой ржавчине обнаружили 67; 3 - восприимчивость;
). По итогам ПЦР-анализа среди 67 устойчивых линий молекулярные маркеры генов устойчивости обнаружены у 11 (16,4%); такой процент не следует считать низким, поскольку из 15 известных генов устойчивости в работе могло быть идентифицировано только 7 (по числу доступных праймеров);
). Две линии (449 и 1897) с обнаруженным маркером гена устойчивости Lr50 оказались восприимчивы к возбудителю листовой ржавчины; несоответствие ожидаемому обсуждается с позиции о специфике расового состава гриба-возбудителя болезни в местной популяции, а также феномена пенетрантности, то есть зависимости фенотипического проявления гена от генетического окружения, «генотипической среды».
Библиографический список
1.Алтухов Ю.П., Салменкова Е.А. Полиморфизм ДНК в популяционной генетике / Алтухов Ю.П. // Генетика. 2002. Т. 38. С. 1173-1195.
2.Банникова А.А. Молекулярные маркеры и современная филогенетика млекопитающих / Банникова А.А. // Журн. общей биологии. 2004. Т. 65. С. 278-305.
.Бербанг Л. Избранные сочинения. М., 1955., 713 с.
.Берлянд-Кожевников, В.М. Селекция пшеницы на устойчивость к основным грибным заболеваниям / В.М. Берлянд-Кожевников, М.А. Федин. - М.: ВНИИТЭИСХ, ВАСХНИЛ, 1977. - 57 с.
.Вавилов Н.И. Селекция как наука // избранные произведения. Т. 1. - Л., 1967. - С.3-8.
.Волуевич Е.А. Генетические подходы в селекции мягкой пшеницы на устойчивость к бурой ржавчине / Волуевич Е.А. // Молекулярная и прикладная генетика. Т. 14, 2013.
.Воронкова А.А. Генетико-иммунологические основы селекции пшеницы на устойчивость к ржавчине. - М.: Колос, 1980. - 191с.
.Гинсбург Э.Х. Описание наследования количественных признаков. Новосибирск, 1984., 249с.
.Гинсбург Э.Х., Никоро З.С. Разложение дисперсии и проблемы селекции. Новосибирск, 1982.,186с.
.Гультяева Е.И. Методы идентификации генов устойчивости пшеницы к бурой ржавчине с использованием ДНК-маркеров и характеристика Lr-генов. СПб., 2012, 71 с.
.Гультяева Е.И., Канюка И.А., Алпатьева Н.В. и др., Молекулярные подходы в идентификации генов устойчивости к бурой ржавчине у российских сортов пшеницы // Доклады РАСХН, 2009. С.23-27.
.Давоян P.O. Использование генофонда диких сородичей для расширения генетического разнообразия мягкой пшеницы.// Цитол. и генет.-1996.-Т. 24.-N4. C. 98-101.
.Дмитриев А.П. Исследование внутрипопуляционных процессов у Puccinia recondita Rob. ex Desm f.sp. tritici Erikss. и генофонда устойчивости пшениц Закавказья к бурой ржавчине: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.15 / А.П. Дмитриев; ВНИИР. - Л., 1975. - 26 с.
.Дорофеев В.Ф, Пшеницы мира. Ленинград "Агропромиздат", 1987.С.12
.Ишкова Т.И., Берестецкая Л.И., Гасич Е.Л.. Левитин М.М., Власов Д.Ю. Диагностика основных грибных болезней зерновых культур. СПб., 2002, 76 с.
.Матвеева Т.В., Павлова О.А., Богомаз Д.И. и др. Молекулярные маркеры для видоидентификации и филогенетики растений / Матвеева Т.В. // Экол. генетика. 2011. Т. 9. С. 32-43.
.Мигушова Э.Ф., Григорьева О.Г. Устойчивость эгилопсов к бурой ржавчине//Тр, по прикл. бот. ген. и селекции. - 1973.- Т. 50. - вып. 1. - 227-243.
.Мигушова Э.ф., Суханбердина Э.Х, Кривченко В.И. Устойчивость эгилопсов к мучнистой росе// Тр. по прикл. бот., ген. и селекции. - 1982.- Т. 68.-вып. 1.-С. 111-117.
.Мочалова, Л. Вредоносность бурой ржавчины пшеницы / Л. Мочалова // Сборник научных трудов Мироновского НИИСХ. - 1978. - Вып. 2. - С. 136-141.
.Потокина Е.К., Ю.В. Чесноков Современные методы геномного анализа в исследованиях генетики количественных признаков у растений.// Сельскохозяйственная биология, 2005, №3, С. 5-7.
.Салина Е.А., Егорова Е.М., Адонина И.Г., Добровольская О.Б., Будашкина Е.Г., Леонова И.Н. ДНК-маркеры для генотипирования мягкой пшеницы (Triticum Aestivum L.) с генетическим материалом Aegilops speltoides и Triticum timopheevii Zhuk.// Вестник ВОГиС. 2008. Т. 12. № 4. С. 620-628.
.Серебровский А.С. Генетический анализ. - М., 1970. - 315 с.
.Смарагдов М.Г. Тотальная геномная селекция с помощью SNP как возможный ускоритель традиционной селекции / Смарагдов М.Г.// Генетика. 2009. Т. 45. С. 725-728.
.Солодухина О.В. Вредоносность бурой ржавчины на посевах короткостебельной диплоидной озимой ржи. Труды прикл. бот., генет., селекц., 1985, т.92, с. 47-51.
.Степанов, К.М. Ржавчина зерновых культур / К.М. Степанов. - Л.: Колос, 1975. - 75 с.
.Сулимова Г.Е. ДНК-маркеры в генетических исследованиях: типы маркеров, их свойства и области применения / Сулимова Г.Е. // Усп. соврем. биологии. 2004. Т. 124. С. 260-271.
.Таврин Э.В. Прилюк Л.В. Получение межвидовых гибридов от скрещивания мягкой пшеницы с T.sinskae.//Генетика.-1983.- Т.19, №8, с.1381-1383.
.Траншель В.Г. Обзор ржавчинных грибов СССР. М-Л, Наука, 1939, 426 с.
.Фляксберг К.А. Система пшениц и скрещивание географически отдалённых форм// Природа 1935. № 4 с. 85-90.
.Хлесткина Е.К. Молекулярные маркеры в генетических исследованиях и селекции / Хлесткина Е.К. // Вавиловский журнал генетики и селекции. Т. 17.
.Хлесткина Е.К. Молекулярные методы анализа структурно-функциональной организации генов и геномов высших растений / Хлесткина Е.К. // Вавилов. журн. генет. и селекции. 2011. Т. 15. № 4. С. 757-768.
.Чмут Л.Я., Мешков В.В, Денисов Д.П. Устойчивость образцов различных видов пшеницы к грибным болезням.//Теор. основы селекции и семеноводства с.-х. культур в Западной Сибири.-1988.-С. 15-23.
34.Beckmann J.S., Soller M. Restriction fragment length polymorphisms in genetic improvement: methodologies, mapp pp ing and costs / Beckmann J.S. // Theor. App App App l. Genet. 1983. V. 67. P. 35-43.
35.Botstein D., White R.L., Scolnick M., Davis R.W. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms / Botstein D. // Am. J. Hum. Genet. 1980. V. 32. P. 314-331.
.Brown-Guedira G.L., Raupp W.J., Sukhwimder-Singh, Gill B.S. Cytogenetic and molecular mapping of the leaf rust resistance gene Lr39 in wheat // Theor. Appl. Genet. 2001. V.102(2-3). P. 347-352.
.Brown-Guerdia G., Singh S., desease resistance. Leaf rust resistance. Lr50. http://maswheat.ucdavis.edu/protocols/Lr50/index.htm
.Brown-Guerdia G., Singh S., desease resistance. Leaf rust resistance. Lr39.
.Burr B., Ev ola S.V., Burr F.A., Beckmann J.S. The app lication of restriction fragment length polymorphism to plant breeding / Burr B. // Ed s J.K. Setlow et al . Genetic Engineering. N.Y.: Plenum Press, 1983. P. 45-59.
.Charmet G., Storlie E. Implementation of genome-wide selection in wheat / Charmet G. //Вавиловский журнал генетики и селекции. 2012. Т. 16. С. 61-68.
.Cox T.S., Raupp W.J., Gill B.S. Leaf rust resistance genes Lr41, Lr42 and Lr43 transferred from Triticum Tauschii to common wheat // Crop Science. 1994. V. 34(2). P. 339-343.
.Dvorak J., Ross K. Mendillinger S. Transfer of salt tolerance fi-om Elytrigia pontica (podp) Holub to wheat by the addition of an incomplete Elytrigia genome // Crop. Sci. - 1985. - V. 25. -№2.-P. 306-309.
.Kihara H., Yamashita K., Tanaka H., Tabushi J. Some aspects of the new amphidiploids synthesized from the Hybrids Emmer wheat -Ae. squarrosa var. strangulate// Wheat inform serv.- 1957. - №6 -P. 13-14.
.Liu Y.G., Tsunewaki K. Restriction fragment length polymorphism (RFLP ) analysis in wheat. II . Linkage maps of the RFLP sites in common wheat / Liu Y.G. // Jap. J. Genet. 1991. V. 66. P. 617-634.
.Mains E.B. Effect of leaf rust (Puccinia triticina Erikss.) on yield of wheat / E.B. Mains // J. Agr. Res. - 1930. - Vol. 40, № 5. - P. 417-446.
.Mc Guire P.E. Dvorak J. High salt - tolerance potential in wheat grasses// Grop. Sci. 1981. V. 21. 5: 702-705.
.McDonald B.A. Pathogen population genetics, evolutionary potential, and durable resistance / B.A. McDonald, C. Linde // Ann. Rev. Phytopathol. - 2002. - Vol. 40. 349-379.
.Mcintosh R.A. & J. Gyarfas, Triticum timopheevii as a source of resistance to wheat stem rust. Z. Pflanzenzuchtg. 1971. 66: 240-248.
.Mcintosh R.A., B. Friebe, J. Jiang, D. & B.S.Gill The Cytogenetical studies in wheat XII. Chromosome Location of a gene for resistance to leaf rust in a Japanese wheat-rye translocation Lien// Euphytica 1995. 82: 141-147.
50.Mcintosh R.A., C.R. Wellings & R.F. Park Wheat rust an atlas of resistance gene, CSIRO, Australia. 1995. P. 234-237.
.Moose S.P., Mumm R.H. Molecular plant breeding as the foundation for 21st century crop improvement / Moose S.P. // Plant Physiol. 2008. V. 147. P. 969-977.
.Riley R. &V. Chapman V. The D-genome ofhexaploid wheat // Wheat Inform. Serv. -1960. № 11. -P. 18-21.
.Sears, E.R., The transfer of leaf rust resistance from Aegilops umbellulata to wheat// Brookhaven Symp. Biol. - 1956. - V. 9-P. 1-20.
.Tanksley S.D. Molecular markers in plant breeding // Plant Mol. Biol. Rep. 1983. V. 1. P. 3-8.
.Tanksley S.D., Nelson J.C. Adv Adv Adv anced backcross QTL QTL QTL analysis: a method for the simultaneous discovery and transfer of valuable QTL QTL QTL s from unadapted germplasm into elite breeding lines // Theor. App l. Genet. 1996. V. 92. P. 191-203.
.Tautz D. Hyp ervariability of simple sequences as a general source for polymorphic DNA markers // Nucl. Acids Res. 1989. V. 17. P. 6463-6471.
.Tomar S.M., Koshudmadhavan M. Nambisan P.N.N. Evaluationof timopheeve wheats for resistance to rusts and powdery mildew// Indian J. Genet. -1988.-V. 48. №1.-P. 69-73.
.Winter and early spring survival of Puccinia recondita on Kansas wheat during 1980-1986 / M.G. Eversmeyer [et al.] // Plant Disease. - 1988. - Vol. 72. - P. 1074-1076.